白斑狗魚越冬期間不同消化器官的脂肪酶活性
發(fā)布時間:2018-06-25 來源: 幽默笑話 點擊:
白斑狗魚(Esox lucius)屬狗魚科(Esocidae),狗魚屬(Esox),分布于亞洲、歐洲和北美,我國僅產(chǎn)于新疆北部額爾齊斯河流域,是新疆特產(chǎn)的以肉食性活餌為主的野生性經(jīng)濟魚類[1]。白斑狗魚病害少,養(yǎng)殖周期短,肉質(zhì)鮮美,體大肉厚,堅韌少刺,深受全國市場青睞[2]。
目前國內(nèi)外魚類學者對關(guān)于溫度和pH值對魚類消化酶活性影響的研究報道較多[3-5],但關(guān)于白斑狗魚消化酶方面的研究較少[6],研究了白斑狗魚在不同溫度和pH下不同消化器官中三種酶的活性大小。魚類消化道的結(jié)構(gòu)不同其消化功能也存在差異,一般研究消化酶的種類及分布時將魚類的消化道分為胃、肝胰臟、幽門盲囊和腸道,腸道又可分為前腸、中腸、后腸,通常不同消化器官內(nèi)分布消化酶的種類和消化酶的活力各不相同,同一種類的同一種酶,也會因其他條件(溫度、季節(jié)、食物、攝食狀態(tài)等)的變化,其活性分布也有所不同[7]。魚類對食物的消化主要發(fā)生在胃和腸的前部,大多數(shù)魚類腸道中的消化酶活性由前段向后段呈遞減趨勢[8-9]。本實驗主要研究越冬期白斑狗魚不同消化器官中消化酶的活性及pH對其酶活性的影響,以便為越冬期白斑狗魚的飼養(yǎng)提供有價值的信息。
1 材料與方法
1.1 實驗材料
1.1.1 白斑狗魚來源 引自新疆養(yǎng)殖地在長春養(yǎng)殖越冬后的4條白斑狗魚,魚體健康,體型勻稱,平均體重為304.9 g,體長平均為38.1 cm。
1.1.2 實驗藥品 標準蛋白酶溶液、0.9% NaCl溶液、考馬斯亮藍染液、新鮮牛奶、95%乙醇、酚酞試劑、0.01 mol/L的NaOH溶液、1%淀粉溶液、0.025 mol/L、pH為6.9的磷酸緩沖液、3,5-二硝基水楊酸顯色液、6 mol/L NaOH、蒸餾水、10 g/L酪蛋白、0.025 mol/L磷酸緩沖溶液(pH 7.5)、10%的三氯醋酸、0.55 mol/L Na2CO3、Folin-酚試劑、0.2 mol/L磷酸二氫鈉-檸檬酸鈉緩沖液。
1.2 方法
1.2.1 酶粗液的制備 將白斑狗魚先在冰箱中冷凍保存,取魚4尾,將實驗魚隨機分成兩組,每次取一組進行實驗,重復兩次,參照劉玉梅[10]等的方法制備粗提取液,分別測定淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶的活性。
1.2.2 脂肪酶活性的測定 脂肪酶活性的測定參照酚酞試劑指示滴定法[11]。酶活性定義為pH 7.5時,每分鐘催化鮮牛奶產(chǎn)生1 μmol脂肪酸為1個脂肪酶活性單位。
1.2.3 磷酸緩沖溶液及pH值梯度的設(shè)定 以0.2 mol/L磷酸二氫鈉-檸檬酸鈉緩沖液調(diào)節(jié)pH,在37 ℃恒溫水浴鍋條件下。pH梯度因部位不同而有區(qū)別,胃的pH梯度設(shè)定為2.0~6.5范圍內(nèi),以pH值0.5為一個梯度, 肝胰臟pH梯度設(shè)定為3.0~7.5范圍內(nèi), 以pH值0.5為一個梯度,腸pH梯度設(shè)定為5.0~9.5范圍內(nèi),以pH值0.5為一個梯度測出各部位消化酶在37 ℃下最適宜的pH值。
1.2.4 數(shù)據(jù)處理
用EXCEL對結(jié)果進行處理,并用SPSS統(tǒng)計軟件進行分析,P>0.05即認為有顯著差異。
2 結(jié)果與分析
2.1 pH值對脂肪酶活性的影響
在37 ℃下,由圖3可知胃脂肪酶在pH 2.0~4.0之間活性迅速上升,在pH 4.0時活性達到最高為230 U/(min·g),此后,隨pH值增加活性開始快速降低,胃脂肪酶的最適pH為4.0;肝胰臟脂肪酶在pH 3.0~4.5之間活性成上升趨勢,在3.0~4.0之間上升緩慢,在4.0~4.5之間迅速上升,在pH 4.5時活性達到最高為342 U/(min·g)此后,隨pH值增加活性開始降低,在4.5~5.5之間快速下降,5.5~7.5之間下降速度減緩,肝胰臟脂肪酶的最適pH為4.5;前腸和中腸在pH值6.0~7.5之間活性成上升趨勢,6.0~6.5之間上升緩慢,6.5~7.5之間迅速上升,在pH 7.5時活性達到最高分別為388 U/(min·g)和468 U/(min·g),此后,隨著pH的增加活性快速下降,前腸和中腸脂肪酶的最適pH分別為7.5和7.5;后腸脂肪酶在pH 6.0~7.0之間活性迅速上升,在pH 7.5時活性達到最高為480 U/(min·g), 此后,隨pH值增加活性快速降低,后腸脂肪酶的最適pH為7.5。詳見圖1和圖2,胃和肝胰臟脂肪酶的最適宜pH值在弱酸性范圍,前腸、中腸和后腸的最適宜pH值在中性或略偏堿性范圍。
2.2 不同消化器官脂肪酶活性比較
白斑狗魚不同器官脂肪酶活性在最適宜pH值條件下,脂肪酶活性后腸>中腸>前腸>肝胰臟>胃(P>0.05),腸是脂肪的主要消化場所,依次是肝胰臟和胃,而在腸中,后腸是脂肪的主要消化場所,詳見表1和圖3。
3 討論
本研究結(jié)果表明,在37 ℃時,白斑狗魚消化系統(tǒng)不同部位脂肪酶的最適宜pH值不同。 本研究結(jié)果表明,白斑狗魚胃、肝胰臟、前腸、中腸和后腸脂肪酶的最適宜pH值分別為4.0、4.5、7.5、7.5和7.0, 本研究結(jié)果與其他文獻[12]略有不同,這可能與魚的種類和食物種類不同有關(guān),也可能與魚類生活水溫和研究時所處的溫度不同有關(guān),這需要進一步研究才能得出結(jié)論。從pH值對脂肪酶的影響來看, 在37 ℃下,胃和肝胰臟內(nèi)脂肪酶在強酸或弱酸條件下活性最高;前腸、中腸和后腸內(nèi)脂肪酶則在中性或偏堿性條件下活性最強。這一結(jié)果于消化系統(tǒng)生理機能是一致的,因魚類的胃內(nèi)多為強酸性,飽食后腸內(nèi)多呈堿性,這與文獻[13]結(jié)果相吻合。John[14]認為,魚類消化酶的最適宜溫度為30~50 ℃,在37 ℃下,脂肪酶活力表現(xiàn)為腸>肝胰臟>幽門盲囊>胃,本實驗研究結(jié)果與前者相近,由此可知腸道是白斑狗魚的主要消化部位。
酶的活性受環(huán)境pH值的影響極為顯著,pH值是酸堿度大小的反映,其對魚類生理活性的影響是多方面的[15]。酸堿度的作用一方面對食物進行酸堿性的消化,另一方面是為消化酶提供適宜的pH值。通常各種酶只有在一定pH值范圍內(nèi)才表現(xiàn)它的活性。因此,為了充分保證食物的消化吸收,促進魚類的生長發(fā)育,可以在飼料中加入一定的酸化劑和外源性酶制劑,這樣可以提高飼料的利用率,同時減少有有機物的排泄量,從而減輕水體污染。
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