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HPLC測定馬甲子藥材中馬甲子1#的含量

發(fā)布時間:2019-08-29 來源: 幽默笑話 點(diǎn)擊:

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  摘要:建立HPLC測定馬甲子1#含量的方法,采用BDS HYPERSIL C18色譜柱(4.6mmxlOOmmx2.4μm),以乙腈-O.1%甲酸溶液為流動相,梯度洗脫,流速為1.OmL/min,檢測波長為320nm。結(jié)果表明馬甲子1#在0.0214-0.8544μg(r=0.9999)范圍進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好,平均加樣回收率為99.4%(RSD=1.18%)。該方法快速,準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,可用于測定馬甲子中馬甲子1#的含量。
  關(guān)鍵詞:馬甲子;馬甲子l#;高效液相色譜法(HPLC);含量測定
  文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A
  文章編號:1674-5124(2015)04-0043-03
  0 引言
  馬甲子Paliurus ramosissimus(Lour.)Poir系鼠李科銅錢屬植物,又名鐵籬笆、銅錢樹。其根部具有發(fā)表解熱,祛風(fēng)利濕,治跌打損傷及心腹疼痛的功能,其葉具有治癰瘡潰瘍作用。經(jīng)本課題組的前期研究證實其葉也具有抗腫瘤作用且療效較好。為了探索馬甲子葉中的相關(guān)活性成分,本文對馬甲子葉中的某些戍分進(jìn)行了提取分離、結(jié)構(gòu)鑒定和抗腫瘤等方面的研究,得到了新的活性單體馬甲子l#,為了進(jìn)一步研究該成分,制定了本文的含量測定方法。
  1 實驗部分
  1.1 儀器與試藥
  1200高效液相色譜儀(美國安捷倫);SartoriusBS2IOS電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)。
  乙腈(色譜純,美國Sigma公司);水(樂百氏純凈水);甲酸、甲醇(分析純,成都市科龍化工試劑廠)。
  藥材:于2013年6月采自四川省牧馬山的鮮葉,經(jīng)鑒定為鼠李科銅錢屬植物馬甲子Paliurus ramo-sissimus(Lour.)Poir.,冷凍干燥備用;馬甲子l#對照品(成都普瑞法科技開發(fā)有限公司,批號:14070109),純度經(jīng)歸一化法測定為97.4%。馬甲子1#經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定,未見相關(guān)文獻(xiàn)報道,屬于新化合物,結(jié)構(gòu)式見圖l。
  1.2 方法與結(jié)果
  1.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗
  色譜柱為BDS HYPERSIL C18色譜柱(4.6mmX100 mmx2.4μm,Thermo Fisher Scientific);以乙腈為流動相A,0.1%甲酸溶液為流動相B,按表l進(jìn)行梯度洗脫;檢測波長為320nm;柱溫為30℃;流速為1.0 mL/min;進(jìn)樣量為10μL。理論塔板數(shù)按馬甲子1#計算應(yīng)不低于3000。分別選擇乙腈-水,乙腈-0.1%冰醋酸溶液,乙腈-0.1%甲酸溶液為流動相,考察不同流動相系統(tǒng)對樣品的分離效果。結(jié)果表明,采用乙腈-0.1%甲酸溶液系統(tǒng)時主峰與雜質(zhì)峰分離較好,且分離度>1.5,故選擇乙腈-0.1%甲酸溶液系統(tǒng)。在小范圍內(nèi)改變進(jìn)樣體積、柱溫及流速,色譜圖無明顯變化。對照品和供試品溶液的色譜圖分別見圖2(a)和圖2(b)。
  1.2.2 樣品的制備
  精密稱取馬甲子1#對照品適量,用甲醇制成含馬甲子1#0.1068mg/mL的對照品貯備液。分析測試中所用對照品溶液由對照品貯備液稀釋得到。
  取馬甲子藥材粉末(過4號篩)約2.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入95%乙醇50mL,稱定質(zhì)量,回流提取2h后,取出,冷卻,再稱定質(zhì)量,用95%乙醇補(bǔ)足損失的質(zhì)量,搖勻,濾過,即得供試品溶液。
  1.2.3 線性范圍考察
  分別精密移取馬甲子l#對照品貯備液0.2,0.5,1.0,2.0,5.0,8.0mL置于lOmL量瓶中,加甲醇定容至刻度,搖勻。按“1.2.1”項下的色譜條件測定馬甲子1#的峰面積,并以進(jìn)樣量對其峰面積進(jìn)行線性回歸,得到回歸方程為:Y馬甲子1#=2.396x103X-4.758(r=0.9999)。結(jié)果表明馬甲子1#在0.0214-0.8544μg范圍進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。結(jié)果見圖3。
  1.2.4 精密度試驗
  取含馬甲子1#0.02136mg/mL的對照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,計算馬甲子1#峰面積的RSD為0.73%,結(jié)果表明進(jìn)樣精密度良好。
  1.2.5 重復(fù)性試驗
  取同一批號的馬甲子藥材粉末(過4號篩)6份,按“1.2.2”項方法制備供試品溶液,測定,計算馬甲子1#含量的RSD為0.70%,結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。
  1.2.6 穩(wěn)定性試驗
  取同一對照品溶液,于室溫下0,2,4,6,8,12,24h分別進(jìn)行測定,以峰面積為指標(biāo)計算馬甲子1#的RSD為1.05%,結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
  1.2.7 加樣回收率試驗
  稱取已測定含量的馬甲子藥材粉末(過4號篩)約2.5 9,精密稱定,置具塞錐形瓶中,共6份,分別精密加入對照品貯備液SmL,精密加入95%乙醇50mL,按“1.2.2”項下方法制備供試品溶液,測定,結(jié)果表明回收率較好(見表2)。
  1.2.8 樣品測定
  在本文色譜條件下,被測成分與其他化合物色譜峰分離度均良好。對10批馬甲子藥材進(jìn)行測定,結(jié)果見表3。
  2 討論
  馬甲子藥材中馬甲子l#含量的測定試驗,通過前期單因素試驗考察了馬甲子1#的提取工藝,并從操作便捷性和節(jié)約資源等方面綜合考慮最終確定了供試品溶液的制備方法。用本文色譜條件測定10批馬甲子藥材中馬甲子1#的含量,其中批號140523的藥材中馬甲子1#含量最高,同時該批次馬甲子藥材抗腫瘤活性最強(qiáng),由此進(jìn)一步確定其為馬甲子藥材抗腫瘤活性成分之一。馬甲子l#含量的測定能夠初步評價不同產(chǎn)地、不同采收期馬甲子藥材的質(zhì)量,為民間癌癥患者用藥提供了一定的參考。
  3 結(jié)束語
  目前對馬甲子的研究主要集中在其根、莖、果實中化學(xué)成分的分離鑒定,而馬甲子葉中化學(xué)成分的研究未見報道。馬甲子l#屬于從馬甲子葉中分離得到具有門樺酸母核的新的五環(huán)三萜類化合物,具有一定的抗腫瘤活性,有較好的研究前景。本文所建立的HPLC法能有效地將馬甲子藥材中馬甲子l#與其他成分分開,分離度>1.5,且峰形較好,分析時間短,為馬甲子1#定量分析提供了參考,為后期的深入研究奠定了一定的基礎(chǔ)。

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