[摘要] 采用超高液相色譜（UPLC）的方法，以Acquity BEH C₁₈色譜柱（2.1 mm×150 mm，1.7 μm） ，流動相為乙腈-水，梯度洗脫，流速為0.3 mL·min^-1，柱溫45 ℃，檢測波長280 nm的色譜條件同時測定白及藥材中的4-羥基苯基-葡萄糖苷、4-（葡糖糖氧基）-肉桂酸葡萄糖氧基芐酯、1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-葡萄糖苷、1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯、二氫菲5和1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-[4-O-肉桂�；鵠葡萄糖苷、 二氫菲1、芐基氫菲3和1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-[4-O-肉桂酰基-6-O-乙�；鵠葡萄糖苷9個指標成分。各指標成分之間分離度良好，在選定的濃度范圍內(nèi)線性關系良好（r≥0.999 3），平均加樣回收率（n=6） 為98.15%～102.2%，RSD為2.1%～3.6%，表明所建立的方法重復性、耐用性良好，結(jié)果準確，經(jīng)對野生和人工種植白及藥材分析，野生白及所測定的9種成分含量高于人工栽培白及藥材，為白及藥材的質(zhì)量評價和控制提供科學依據(jù)。
　　[關鍵詞] 白及；多指標成分；超高液相色譜（UPLC）
　　[收稿日期] 2014-01-02
　　[基金項目] 國家自然科學基金項目（81360636）；貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開發(fā)專項項目（黔科合中藥字[2010]5027號）；貴陽市科學技術(shù)計劃項目（筑科合同[2012204]20號）
　　[通信作者] 李勇軍，教授，主要研究方向天然藥物化學和中藥新藥研發(fā)，Tel：（0851）6908468，E-mail：gywam100@163.com
　　白及為蘭科植物白及Bletilla striata （Thund.） Reichb. f.的干燥塊莖，具有收斂止血，消腫生肌等功效[1]�，F(xiàn)代藥理研究表明，白及藥用功能廣泛，藥用價值高，具有止血，抗菌，抗腫瘤及促進血管內(nèi)皮細胞生長等藥理作用。另有研究發(fā)現(xiàn)白及正逐漸成為我國現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè)的重要原材料[2]。但目前白及藥材質(zhì)量控制標準較薄弱，《中國藥典》2010年版一部和第二增補版僅收載了性狀、薄層色譜鑒別等[3]，無含量測定等重要的質(zhì)量控制指標，因此難以評價和控制白及的質(zhì)量。作者在對白及的研究中，曾對白及的多糖和其中含量較高的化合物militarine{雙[4-（β-D-吡喃葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯}為指標進行了質(zhì)量控制研究[4-6]，而白及化學成分有芪類、聯(lián)芐類、菲類、聯(lián)菲類、聯(lián)菲醚類、菲并吡喃類、聯(lián)芐葡萄糖苷類、菲并螺甾內(nèi)酯類以及甾體、三萜和花色素苷類等化合物近50種[7-9]，以白及中單一指標含量控制白及藥材質(zhì)量的方法，不能較全面的反映白及整體質(zhì)量信息。文獻報道白及水提物及甲醇提取物是白及止血及抗?jié)�瘍的有效部位[9]，國內(nèi)外對白及的質(zhì)量控制方法研究主要為多糖、總酚大類成分、單一成分（militarine， 肉桂酸）或某一類成分的分析報道[4-5，10-12]，未見同時測定白及藥材中4-（葡萄糖氧）芐醇及肉桂酸酯、2-異丁基蘋果酸酯、二氫菲和芐基氫菲類的多指標成分的報道。本研究以白及中分離到的含量較高化合物，應用超高液相色譜法，建立了同時測定白及中9個指標性成分的分析方法，為白及藥材的質(zhì)量控制和評價提供科學依據(jù)。
　　1 材料
　　Acquity UPLC（美國沃特世公司，包括二元梯度泵、真空脫氣機、自動進樣器、色譜柱溫箱、陣列二極管檢測器、Empower 2工作站）；TGL-16G高速離心機（上海安亭科學儀器廠）；1/10萬電子天平（AE240，梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；超純水機（四川沃特爾科技發(fā)展有限公司）。
　　白及藥材由貴陽醫(yī)學院藥學院生藥學與藥用植物學教研室龍慶德副教授鑒定為蘭科植物白及B. striata的干燥塊莖。4-羥基苯基-葡萄糖苷（4-hydroxymethylphenyl β-D-glucoside）；4-（葡糖糖氧基）-肉桂酸葡萄糖氧基芐酯（blestroside）；1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-葡萄糖苷（dactylorhin A）；1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯（militarine）；二氫菲5（dihydrophenanthrene 5）；1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-[4-O-肉桂�；鵠葡萄糖苷（gymnoside V）；二氫菲1（dihydrophenanthrene 1）；芐基氫菲3（benzylphenanthrene 3）和1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-[4-O-肉桂�；�-6-O-乙酰基]葡萄糖苷（gymnoside Ⅸ）由本實驗室從白及藥材中分離得到，經(jīng)¹H，¹³ C-NMR，MS，UV和 IR鑒定，TLC純度檢查顯示單一斑點，UPLC-PDA在多個波長檢測，峰面積歸一化含量均大于98%；乙腈（色譜純，美國TEDIA有限公司，批號AS1122-001），甲酸（美國TEDIA有限公司，批號FS0630-020），甲醇（分析，上海振興化工一廠，批號200909061），純凈水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司，批號20120722）。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件
　　ACQUITY BEH C₁₈色譜柱（2.1 mm× 150 mm， 1.7 μm）；流動相乙腈（A）-水（B）；流速0.3 mL·min^-1；梯度洗脫（0～10 min，5%～16% A；10～24 min，16%～30% A；24～27 min，30%A；27～32 min，31% A；32～33 min，31%～37% A；33～45 min，37%～55% A；45～46 min，55%～100% A）；柱溫為45 ℃，陣列二極管檢測器（PDA），檢測波長280 nm，進樣量2 μL。

相關熱詞搜索：測定 藥材 含量 成分 指標