HPLC法同時(shí)測定阿咖片中2種有效成分的含量
發(fā)布時(shí)間:2018-06-24 來源: 散文精選 點(diǎn)擊:
【中圖分類號(hào)】R927.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-6851(2018)03--01
阿咖片作為解熱鎮(zhèn)痛藥,主要是由阿司匹林和咖啡因組成的復(fù)方制劑,F(xiàn)行國家藥品標(biāo)準(zhǔn)采用的是滴定法分別測定2種成分,操作繁瑣,結(jié)果誤差大。本法采用HPLC法同時(shí)測定阿司匹林和咖啡因含量,操作簡便,結(jié)果精準(zhǔn)。
1 儀器與試藥
1.1 儀器 Waters e2695型高效液相色譜儀;2998PDAD型UV檢測器;Empower色譜工作站;PH計(jì);超聲;天平
1.2 試藥 仁和阿咖片(江西制藥有限責(zé)任公司,批號(hào):1411071 1401161 1502281);阿司匹林對(duì)照品(批號(hào):100113-201104,含量:100%,中檢院);咖啡因?qū)φ掌罚ㄅ?hào):171215-201010,含量:100%,中檢院);甲醇為色譜純;甲酸為分析純;純化水
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件 色譜柱:Hypersil Bos C18(4.6×200mm,5um);柱溫:30℃;流動(dòng)相: 水(用甲酸調(diào)PH至2.6)-甲醇(70:30);檢測波長:275nm;流速:1.0ml/min;進(jìn)樣體積:20ul,在該條件下,阿咖片中兩種成分的色譜圖見圖1
2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取阿司匹林和咖啡因?qū)φ掌愤m量,用流動(dòng)相溶解配制成含阿司匹林0.419mg/ml咖啡因0.0486mg/ml作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。
2.3 供試品溶液制備 取本品10片,稱重并研細(xì),精密稱取粉末適量(約相當(dāng)于阿司匹林50mg)置100ml容量瓶,加流動(dòng)相適量,搖勻并超聲15分鐘,用流動(dòng)相稀釋至刻度,濾過,取續(xù)濾液5ml置于25ml容量瓶,用流動(dòng)相稀釋至刻度即得。
2.4 方法學(xué)考察
2.4.1 線性關(guān)系 精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液1ml,2.5ml,5ml,10ml,15ml分別置于20ml容量瓶并用流動(dòng)相稀釋至刻度,分別進(jìn)樣20ul測定,以濃度(mg/ml)為X軸,峰面積為Y軸,計(jì)算得阿司匹林和咖啡因線性回歸方程分別為:Y 阿司匹林=7×106X-8015.8,R=1,Y咖啡因=5×107X-19819,R=0.9997。結(jié)果表明阿司匹林和咖啡因的線性范圍分別是1.15-314.25ug/ml與0.396-36.45ug/ml。
2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取阿司匹林和咖啡因混合對(duì)照品(濃度分別為0.1048mg/ml 0.0122mg/ml)20ul,重復(fù)進(jìn)樣6針,測得阿司匹林和咖啡因峰面積的RSD分別為0.40% 0.45%。
2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份混合對(duì)照品溶液,在0h 2h 4h 6h 8h依次進(jìn)樣測定,阿司匹林和咖啡因的RSD分別為1.6% 0.7%,結(jié)果表明8h內(nèi)阿司匹林和咖啡因的穩(wěn)定性良好。
2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取同一樣品(批號(hào):1411071),照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按上述色譜條件進(jìn)樣20ul,測定并計(jì)算阿司匹林和咖啡因的含量,RSD(n=6)分別為0.9% 1.0%。
2.4.5 耐用性試驗(yàn) 通過改變柱溫在25℃ 30℃ 35℃的條件下依次進(jìn)樣,測得阿司匹林和咖啡因峰面積的RSD分別為1.6% ,結(jié)果表明柱溫在25-35℃范圍內(nèi)對(duì)結(jié)果的影響很小。
2.4.6 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品適量(約相當(dāng)于阿司匹林50mg),用流動(dòng)相溶解,超聲15分鐘后定容至100ml,取續(xù)濾液5ml定容至50ml作為本底,再分別取續(xù)濾液5ml,按其含量的80% 100% 120%各3份加入對(duì)照品儲(chǔ)備液混勻并定容至50ml即得。測得阿司匹林的平均回收率為98.1%(RSD=0.8%)和咖啡因的平均回收率為101.2%(RSD=0.2%)
2.5 樣品含量測定 按照本法條件,以外標(biāo)法分別測定3批樣品,計(jì)算阿司匹林和咖啡因的含量,結(jié)果見表2:
3 討論
3.1 酸堿度 阿司匹林易水解為游離的水楊酸,因此只有合理的調(diào)節(jié)PH才能有效地抑制水解,防止拖尾。而在實(shí)驗(yàn)過程中,我們發(fā)現(xiàn)加入適量的甲酸,阿司匹林峰型良好,無拖尾現(xiàn)象,而酸性過強(qiáng)會(huì)損害色譜柱,酸性不夠又沒法很好的抑制阿司匹林水解,因此選擇用甲酸調(diào)節(jié)PH至2.6,效果比較好。
3.2 檢測波長的確定
取稀釋的對(duì)照品儲(chǔ)備液3份,分別進(jìn)行紫外掃
描,結(jié)果顯示阿司匹林和咖啡因在275nm處均有較大吸收,因此選擇275nm作為檢測波長。
3.3 流動(dòng)相的選擇
我們比較了甲醇-水,乙腈-水,甲醇-乙腈-水三種流動(dòng)相系統(tǒng),乙腈-水流動(dòng)相系統(tǒng)中阿司匹林和咖啡因色譜峰的分離度達(dá)不到要求,甲醇-乙腈-水系統(tǒng)色譜峰分離度較好,但色譜柱柱壓較高且容易基線漂移,因此,我們確定甲醇-水為本文的流動(dòng)相體系。
3.4 本試驗(yàn)建立了HPLC同時(shí)測定阿咖片中阿司匹林和咖啡因的分析方法,方法簡單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,可用于阿咖片的含量測定。
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