摘 要 目的：HPLC測定在液氮條件研磨以及在自然風(fēng)干條件下研磨不同種肉蓯蓉中松果菊苷的含量，比較野生肉蓯蓉和人工培養(yǎng)的肉蓯蓉中松果菊苷含量。方法：采用日本島津LC-20A高效液相色譜儀測定。色譜柱為YMC-Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm，5μm；YMC Co Ltd，Japan）；流動相：乙腈-甲醇-1%甲酸（10∶15∶75）；檢測波長334 nm；流速0.7 mg·mL-1。柱溫30 ℃。結(jié)果：處理條件的不同對松果菊苷含量有非常明顯影響，液氮條件下研磨的肉蓯蓉中松果菊苷的含量普遍高于自然風(fēng)干條件下研磨的肉蓯蓉；野生肉蓯蓉的有效成分含量要遠(yuǎn)高于人工培養(yǎng)。
　　關(guān)鍵詞 肉蓯蓉；松果菊苷；高效液相色譜法
　　中圖分類號：R284 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2018.29.066
　　肉蓯蓉（Herba Cistanches Y.C.Ma）又稱紅柳、大蕓，屬于瀕危物種，是一種寄生在沙漠樹木梭梭、紅柳根部的寄生植物。在我國主要分布于內(nèi)蒙古、寧夏、甘肅和新疆[1]，素有“沙漠人參”之美譽，具有極高的藥用價值。中國藥典規(guī)定，以列當(dāng)科植物肉蓯蓉的干燥帶鱗片肉質(zhì)莖入藥[2]，其主要藥用成分有苯乙醇苷類，根據(jù)其取代基的不同可分為松果菊苷、類葉升麻苷、肉蓯蓉苷等[3]。其中，松果菊苷（Echinacoside）具有改善性功能、抗氧化和清除自由基作用，而且具有一定的抗凋亡作用[4]。20世紀(jì)80年代以來，高速液相色譜技術(shù)（HPLC）廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的分離中，這種技術(shù)為苯乙醇苷類化合物的分離提供了一種簡單快速的方法[5-6]。選擇采用HPLC法，分析不同生長時期野生肉蓯蓉和人工栽培肉蓯蓉主要有效成分松果菊苷的含量，為合理開發(fā)和利用肉蓯蓉及有效評價肉蓯蓉的質(zhì)量提供一定科
　　學(xué)依據(jù)。
　　1 儀器與試劑
　　日本島津LC-20A高效液相色譜儀，LC-20AT串聯(lián)雙柱塞泵，CTO-20A柱溫箱，SPDA-20A紫外可見雙波長檢測器；昆山KQ-100型超聲波清洗器；乙腈（色譜純，天津光復(fù)化工研究所）；甲醇（色譜純，天津光復(fù)化工研究所）；甲酸（色譜純，天津光復(fù)化工研究所）；水（屈臣氏蒸餾水）。
　　對照品：松果菊苷，含量≥98.43%（上海原葉生物科技有限公司）。
　　肉蓯蓉樣品5種：人工鮮一年期以下（未出頭）肉蓯蓉，人工鮮（出頭）肉蓯蓉，人工干肉蓯蓉，野生鮮肉蓯蓉，野生三年期以上干肉蓯蓉。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件的確定
　　為使所測松果菊苷在液相色譜圖中的峰與其他物質(zhì)分離，以及控制泵壓、時間能在合適的范圍內(nèi)，對色譜的條件進(jìn)行了實驗改進(jìn)，經(jīng)流動相的優(yōu)化實驗得出結(jié)論：溫度越高，液相的保留時間越短，濃度越低，泵壓越小且保留時間變短，但峰高變低，不利于測量。根據(jù)室溫、泵的最大承壓等客觀狀況，最終確定以流動相為乙腈-甲醇-1%甲酸（10∶15∶75）、檢測波長334 nm、流速0.7 mL/min、柱溫30 ℃的條件進(jìn)行分析，得到的信息較為豐富，各成分峰形尖銳而且分離度良好。
　　2.2 色譜柱的確定
　　色譜柱：YMC-Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm，
　　5 μm；YMC Co Ltd，Japan）。
　　2.3 實驗溶液制備
　　2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備
　　精密稱取松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，加流動相乙腈-甲醇-1%甲酸（10∶15∶75），分別制成0.06 mg·mL-1、
　　0.05 mg·mL-1、0.04 mg·mL-1、0.03 mg·mL-1、
　　0.02 mg·mL-1、0.01 mg·mL-1和0.005 mg·mL-1的松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
　　2.3.2 供試品溶液的制備
　　取適量的人工一年期以下（未出頭）鮮肉蓯蓉、人工鮮肉蓯蓉、野生鮮肉蓯蓉用研缽在液氮下研磨成粉末；同樣再取適量的上述3種肉蓯蓉切成塊狀，在陰涼通風(fēng)處自然風(fēng)干，干燥后，將其粉碎研磨成粉末狀。人工干肉蓯蓉及野生三年期以上干肉蓯蓉直接粉碎研磨成粉末狀。取上述制的肉蓯蓉粉末（過100目篩）0.5 g，置于離心管中，加入流動相25 mL，稱重后浸泡30 min，超聲處理40 min，冷卻后再稱定重量，用流動相補足缺失的重量，搖勻后離心，取上清液用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。
　　2.4 松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)樣品回歸曲線的繪制
　　將配制好的松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)樣品分別注入液相色譜儀，以對照品的濃度（mg·L-1）為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，得到回歸方程為
　　Y=66 867 100X-46 360.83，R2=0.986 37，顯示松果菊苷在0.1～1.2μg內(nèi)呈良好線性關(guān)系。
　　2.5 樣品測定
　　按照2.3所示方法，制備樣品液，然后在色譜條件項下測定，標(biāo)樣及樣品的HPLC圖譜見圖1。各樣品中松果菊苷的含量見表1。
　　3 討論
　　松果菊苷是肉蓯蓉主要的有效成分之一，松果菊苷能夠很好地代表肉蓯蓉藥理作用的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，使藥材的質(zhì)量評價和其藥理作用相對應(yīng)，提高肉蓯蓉質(zhì)量評價的針對性。
　　處理條件的不同對松果菊苷含量有明顯的影響，在液氮條件下研磨的肉蓯蓉要比在自然風(fēng)干條件下研磨的肉蓯蓉中松果菊苷的含量普遍都高。普通的風(fēng)干會降低松果菊苷的含量，可能是在風(fēng)干過程中損耗或是松果菊苷發(fā)生了轉(zhuǎn)化。為防止有效成分含量減少、保證肉蓯蓉藥效，應(yīng)選取合適的處理方法。
　　一直以來，大部分人認(rèn)為肉蓯蓉的人工栽培環(huán)境以及生長習(xí)性與野生品沒有明顯區(qū)別，質(zhì)量也相差無幾，往往只重視產(chǎn)量，并未對質(zhì)量進(jìn)行分析。本研究表明，人工栽培的肉蓯蓉松果菊苷的含量低于野生肉蓯蓉松果菊苷的含量。最高的為野生鮮肉蓯蓉0.336 0%，含量最低的是人工鮮肉蓯蓉0.007 0%。因此在栽培技術(shù)上仍需研究，提高有效成分的含量。
　　肉蓯蓉質(zhì)量的好壞取決于其有效成分松果菊苷含量的多少，而有效成分又與采收的季節(jié)、時間、方法有很大的關(guān)系，所以肉蓯蓉的采收應(yīng)該考慮有效成分的積累狀態(tài)和生長發(fā)育階段。既考慮質(zhì)量，又考慮產(chǎn)量。
　　本方法測定松果菊苷的含量，簡便、精密度高、重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠�？捎糜谌馍惾厮幉牡暮�量測定。
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　�。ㄘ�(zé)任編輯：劉昀）

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