QuEChERS結(jié)合HPLC—MS/MS法測定鮮煙葉中的2種抑芽劑
發(fā)布時間:2019-08-25 來源: 人生感悟 點擊:
摘要:建立鮮煙葉中二甲戊樂靈、仲丁靈2種抑芽劑的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)檢測方法。以乙腈為提取溶劑,對鮮煙葉中2種抑芽劑進行提取,采用新型復(fù)合吸附劑的QuEChERS凈化方法,用N-丙基乙二胺(PSA)、C18和石墨化碳黑(GCB)3種復(fù)合吸附劑凈化,HPLC-MS/MS測定,以電噴霧正離子模式(ESI+),iFunnel離子聚焦,多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式下進行檢測,基質(zhì)匹配外標法定量。通過優(yōu)化條件,在10~500 μg/kg范圍內(nèi),二甲戊樂靈、仲丁靈的檢測線性相關(guān)系數(shù)(R2)均大于0.995,檢出限(LOD)為1.5~2.4 μg/kg,定量限(LOQ)為5.0~7.9 μg/kg,在3個添加水平下的回收率范圍88.1%~96.4%,相對標準偏差(RSD)為3.2%~9.3%。試驗方法可用于鮮煙葉中二甲戊樂靈、仲丁靈抑芽劑的準確測定。
關(guān)鍵詞: QuEChERS;復(fù)合吸附劑;抑芽劑;鮮煙葉;高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)
中圖分類號:O657.7;TS41+1 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2016)11-2888-04
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.11.045
煙草抑芽劑主要包括馬來酰肼、二甲戊樂靈、仲丁靈和氟節(jié)胺4種,可以提高煙葉產(chǎn)量和品質(zhì),其中二甲戊樂靈、仲丁靈(圖1)在煙葉中的殘留量較低,成為了目前成熟、研究多、應(yīng)用廣泛的2種煙草抑芽劑[1,2],但有研究表明這2種抑芽劑可以毒害細胞并損害DNA,引發(fā)直腸癌和肺癌[3-5]。2014年,食品安全國家標準規(guī)定二甲戊樂靈和仲丁靈這2種抑芽劑的每日允許攝入量(ADI)分別為0.03和0.2 mg/kg[6]。抑芽劑關(guān)系到煙草質(zhì)量安全,生產(chǎn)者需要對抑芽劑使用以及在鮮煙葉中的殘留進行監(jiān)測,以防止抑芽劑的濫用[7,8]。因此,建立快速、準確、靈敏的鮮煙葉中抑芽劑的檢測方法迫在眉睫。
已有關(guān)于不同基質(zhì)中抑芽劑類物質(zhì)分析方法的研究報道,常見的前處理方法有液液萃。↙LE)[9]、固相萃。⊿PE)[10]、凝膠滲透色譜法(GPC)[11,12]和QuEChERS[13,14],這幾種方法都存在一些不足之處,如LLE有機溶劑消耗量大,SPE操作復(fù)雜,GPC方法重現(xiàn)性不好。經(jīng)典的QuEChERS方法雖簡便快速,但采用單一吸附劑難以去除鮮煙葉中對質(zhì)譜檢測干擾較大的葉綠素、糖類、脂肪酸等雜質(zhì),也無法適用于鮮煙葉中抑芽劑的殘留分析。關(guān)于鮮煙葉中抑芽劑的檢測方法,國內(nèi)鮮有相關(guān)文獻報道,本研究采用新型復(fù)合吸附劑的QuEChERs凈化方法,有效地去除鮮煙葉中雜質(zhì)的干擾,結(jié)合HPLC-MS/MS技術(shù),能夠快速、簡便、準確地測定鮮煙葉中二甲戊樂靈、仲丁靈2種抑芽劑的殘留。
1 材料與方法
1.1 儀器與試劑
儀器:Agilent 1290高效液相色譜儀、Agilent 6490三重四極桿質(zhì)譜儀(美國Agilent公司);渦旋混合器(美國Scientific Industries公司);離心機(美國Beckman Coulter公司);超純水系統(tǒng)(美國Millipore Milli-Q Gradient公司);KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);氮吹儀(美國Caliper LifeSciences公司);SR-2DS型水平振蕩器(日本TATEC公司)。
試劑:甲醇、乙腈(色譜純,美國Fisher Scientific公司);石墨化碳(GCB)、N-丙基乙二胺(PSA)、C18(天津Agela Technologies公司);二甲戊樂靈、仲丁靈(德國Dr. Ehrenstorfer公司);甲酸(色譜純,美國Sigma公司);無水MgSO4、NaCl(分析純,上海國藥集團)。
標準溶液:準確稱取二甲戊樂靈和仲丁靈標準品(精確至0.000 1 g),用甲醇分別溶解并配制成100.0 mg/L的標準儲備液;混合2種標準溶液,臨用前取標準儲備液用甲醇稀釋成10 mg/L的標準溶液,儲存于4 ℃冰箱中備用。
1.2 試驗方法
1.2.1 提取 取適量鮮煙葉,去除主脈,剪碎后放入均漿機中充分絞碎。準確稱取絞碎的樣品2.0 g,置于50 mL具塞離心管中,加入10 mL乙腈,在水平振蕩器上振蕩提取10 min,然后加入1.0 g無水MgSO4和0.5 g NaCl,立即渦旋1 min,防止無水MgSO4結(jié)塊,最后以5 000 r/min離心8 min。
1.2.2 凈化 吸取2.0 mL離心后的上清液,將上清液轉(zhuǎn)移至裝有30 mg C18、50 mg PSA和10 mg GCB吸附劑的5.0 mL離心管中,渦旋2 min,5 000 r/min離心3 min。吸取1.0 mL的上清液,用氮氣吹至近干,殘留物用甲醇∶水(9∶1,V/V)定容至1.0 mL后過0.22 μm濾膜,供HPLC-MS/MS分析。
1.3 測試條件
高效液相色譜條件Agilent Eclipse XDB-C18 column(150 mm×4.6 mm,5 μm),在線過濾器(Agilent 公司);流動相A為甲醇,B為0.1%(V/V)甲酸水溶液;等度洗脫甲醇∶0.1%甲酸水(90∶10,V/V);流速0.4 mL/min;運行時間13.0 min;柱溫40 ℃;進樣體積5 μL。
質(zhì)譜條件:電噴霧離子源(ESI),正離子模式;毛細管電壓3 500 V;霧化氣壓力1.4×10-5 Pa(20 psi);干燥氣溫度250 ℃;干燥氣流量15 L/min;鞘氣溫度300 ℃;鞘氣流量11 L/min;采集方式多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM),其他參數(shù)見表1。
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