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中草藥有效成分的高效提取及抑菌性檢測(cè)

發(fā)布時(shí)間:2018-06-24 來源: 美文摘抄 點(diǎn)擊:

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  【中圖分類號(hào)】R544.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】2095-6851(2018)03--01
  金黃色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)是嚴(yán)重危害人類生命健康的一種重要病原菌,它是引起人類化膿感染中最常見的病原菌,可直接導(dǎo)致局部化膿感染、肺炎等疾病,甚至引發(fā)敗血癥、膿毒癥等全身感染。[1]目前,臨床上用于治療細(xì)菌感染的藥物是抗生素,但是抗生素通過直接抑制病原菌的生長(zhǎng)或者以直接殺死病原菌的方法來達(dá)到治療的效果。[2]這種固有的作用機(jī)理給予細(xì)菌強(qiáng)大的選擇壓力催生并進(jìn)一步富集了耐藥性菌株,因此細(xì)菌的耐藥性已經(jīng)成為日益嚴(yán)峻的全球公共衛(wèi)生問題。
  中草藥作為我國(guó)的優(yōu)勢(shì)國(guó)藥,因其成分復(fù)雜,具有對(duì)人體毒副作用小,易于代謝等優(yōu)點(diǎn),具有廣闊應(yīng)用前景。
  據(jù)報(bào)道,許多中草藥都具有抗菌性和抗真菌作用,其中魚腥草、五倍子、金銀花、甘草相對(duì)于其他中草藥材而言,具有來源廣泛、價(jià)格低廉等特點(diǎn),故選用這四種中草藥進(jìn)行抑菌性實(shí)驗(yàn),以期從中篩選出抑菌性最好的中草藥,為臨床研究及應(yīng)用提供一種參考。[3]
  1 實(shí)驗(yàn)材料
  1.1 中草藥 魚腥草(Houttuynia cordata Thunb)、五倍子(Galla Chinensis )、金銀花(honeysuckle)、甘草(glycyrrhiza)
  1.2 菌種 金黃色 葡萄球菌(Staphyloccocus aureus) 西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院提供。
  1.3 培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
  2 實(shí)驗(yàn)過程
  2.1 準(zhǔn)備階段
  2.1.1 中草藥有效成分提取
  2.1.1.1 魚腥草(癸酰乙醛):選取魚腥草新鮮地下莖,剪成2cm長(zhǎng)小段置于磨口錐形瓶中,加入適量乙酸乙酯浸泡456小時(shí)(40℃水浴加熱)后,采用水蒸氣蒸餾法對(duì)有效成分進(jìn)行提取,所得淺黃色精油即為癸酰乙醛粗提取物,保存?zhèn)溆谩?br>  2.1.1.2 五倍子(沒食子酸):將五倍子洗凈、烘干(70℃烘箱中烘烤48h)并粉碎(粉碎樣通過60目篩),將粉末置于磨口錐形瓶中,加入適量濃度為15U/g的單寧酶酶制劑,在PH=6的條件下40℃水浴加熱4h,最后將提取液置于100℃沸水中加熱5min以達(dá)到滅酶的目的,所得溶液即為沒食子酸粗提取物,保存?zhèn)溆谩?br>  2.1.1.3 金銀花(金銀花提取物):將金銀花提前用水潤(rùn)濕,在蒸餾器內(nèi)安裝一個(gè)多孔隔板,樣品置于隔板上,進(jìn)行加熱蒸餾,所得揮發(fā)油即為金銀花粗提取物,保存?zhèn)溆谩?br>  2.1.1.4 甘草(甘草總黃酮):將甘草洗凈、烘干(50℃)并粉碎(粉碎樣通過80目篩),利用水提法除去其中的甘草酸,過濾、烘干,置于磨口錐形瓶中,向其中加入適量無水乙醇,在超聲功率為250W的超聲清洗儀中60℃C提取1h,過濾,所得濾液即為甘草總黃酮粗提取物,保存?zhèn)溆谩?br>  2.2 試驗(yàn)階段
  2.2.1 藥敏紙片法
  2.2.1.1 藥敏紙片的制備:將空白藥敏紙片在試驗(yàn)前浸泡在各中草藥提取液中4-5小時(shí)。
  2.2.1.2 涂板:
  2.2.1.1.1 培養(yǎng)基的制作 蛋白胨10g,牛肉膏3g,NaCl5g,加熱至所有藥品熔化后,蒸餾水定容至1000ml,瓊脂15g,調(diào)節(jié)pH=7.0~7.2,高溫高壓蒸汽滅菌30min,待冷卻至55℃左右時(shí)倒入培養(yǎng)皿。
  2.2.1.1.2 接菌 待培養(yǎng)皿冷卻后,取10-6濃度金黃色葡萄球菌懸液,用無菌微量移液器取10μL菌液,盡快用無菌L型涂菌棒均勻涂布于培養(yǎng)基表面,靜置2-3min,將制備好的藥敏紙片放置在培養(yǎng)基中央,37°C培養(yǎng)24h。
  2.2.1.3 測(cè)量:用千分尺測(cè)量抑菌圈直徑,標(biāo)準(zhǔn)為人肉眼可見的無細(xì)菌生長(zhǎng)的邊緣。
  2.2.2 MIC測(cè)定
  2.2.2.1 藥液稀釋:將中草藥原液分別稀釋10倍、20倍、40倍、80倍、160倍、320倍、640倍、1280倍、2560倍,即最終藥液濃度分別為100mg/ml、50mg/ml、25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml、3.125mg/ml、1.5625mg/ml、0.7825mg/ml、0.39125mg/ml。
  2.2.2.2 MIC實(shí)驗(yàn) 將上述稀釋液各取1ml分別置于9支試管中,分別向其中0.1ml菌液(菌液濃度為105cfu/ml),設(shè)空白對(duì)照管,在恒溫培養(yǎng)箱中37℃恒溫培養(yǎng)24h。
  3.結(jié)果與討論
  3.1 藥敏紙片法實(shí)驗(yàn)結(jié)果
  表1結(jié)果顯示,四種中草藥均有較好的抑菌效果,其中以五倍子的抑菌效果最為明顯,這四種中草藥的抑菌性排序?yàn)槲灞蹲?金銀花>甘草>魚腥草。
  3.2 MIC結(jié)果
  3.3 分析與討論
  金黃色葡萄球菌作為臨床感染主要病原菌之一,不同的中草藥對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌、殺菌作用、原理不同[4]。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得,五倍子、甘草、金銀花、魚腥草這四種中草藥對(duì)金黃色葡萄球菌抑制作用效果最好的是五倍子,其次為金銀花、甘草,最小為魚腥草。而五倍子的主要成分為鞣酸,鞣酸具有凝固蛋白的作用,能使菌體內(nèi)的原生質(zhì)及酶等蛋白質(zhì)凝固,導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)代謝受到影響甚至死亡[5],且五倍子在我國(guó)資源分豐富、來源廣泛,符合生產(chǎn)生活需求。
  因此,我們有責(zé)任去利用好我國(guó)的優(yōu)勢(shì)國(guó)藥,開發(fā)出中草藥更大的潛在價(jià)值,為日后減少抗生素的使用,延長(zhǎng)抗生素的使用壽命打下堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。
  參考文獻(xiàn)
  陳洪升.金黃色葡萄球菌氨基糖苷類、喹諾酮耐藥基因的研究[D].廣東藥學(xué)院,2015
  沈慧玲.關(guān)于呼吸內(nèi)科疾病的抗生素治療探究[J].醫(yī)藥衛(wèi)生:文摘版:00119-00119.
  李軍紅,田勝尼,方曉光,等.5種常見中草藥的抑菌性研究[J].生物技術(shù)通報(bào),2006(c00):395-399.
  王瑞君.幾種中草藥對(duì)金黃色葡萄球菌體外抑制作用的研究[J].現(xiàn)代食品科技,2009,25(9):1104-1106.
  王利,林華忠,劉玉娟,等.4種中草藥對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2012(17):258-258.

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