摘 要：馬兜鈴酸是一種腎毒素，具有一定的生理活性，但也能造成腎小管大量喪失，導致腎衰竭。在應用含馬兜鈴酸類中藥材時，應當嚴格控制其用量，盡可能避免其毒副作用。本文基于一種馬兜鈴總酸的含量測定方法，測定目前市售的幾種含馬兜鈴酸類中藥材中馬兜鈴總酸含量，以指導臨床用藥。
　　關(guān)鍵詞：馬兜鈴酸 含量 中藥材
　　中圖分類號：R282 文獻標識碼：A 文章編號：1003-9082（2018）10-00-01
　　馬兜鈴酸為硝基菲類有機酸類化合物，天然存在于諸如馬兜鈴屬與細辛屬等馬兜鈴科植物中，此外，在依靠吸食這類植物生存的蝴蝶體內(nèi)，也存有一定量的馬兜鈴酸。此類馬兜鈴科植物曾廣泛地被中醫(yī)作為原生藥材入藥。但同時馬兜鈴酸也是一種較為嚴重的致病因素，有相關(guān)的文獻報道，馬兜鈴酸是一種腎毒素，可導致馬兜鈴酸腎病等嚴重疾病，同時還具有致癌作用及致突變作用。2017年10月27日，在世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)公布的一份致癌物清單中，馬兜鈴酸、含馬兜鈴酸的植物均在其列。近年來國內(nèi)外的臨床治療中，因服用過量的馬兜鈴酸而導致腎衰竭的病例也不在少數(shù)。
　　一、測定方法
　　本次測定以馬兜鈴總酸的含量為指標，用紫外分光光度法測定市售的不同產(chǎn)地含馬兜鈴酸類中藥材中馬兜鈴總酸含量。紫外分光光度法是一種較為常用的定量測定、鑒別與雜質(zhì)檢查方法，其原理是通過測定待測物質(zhì)處在不同波長時的吸光度獲得待測物質(zhì)的吸收光譜，結(jié)果以繪制波長與吸光度之間的關(guān)系圖呈現(xiàn)。與其他測定方法相比較，紫外分光光度法具有較高的靈敏度，測定工作所涉及的儀器設備較為簡單，操作也較為方便，選擇性好，同時能夠較快地獲得結(jié)果，因此得到了較為廣泛的應用。
　　本次測定選擇的紫外可見分光光度計儀器型號為SP-752型，所測中藥材為購于江蘇等地的青木香，購于陜西等地的馬兜鈴，購于吉林等地的關(guān)木通，購于東北等地的遼細辛。無水乙醇、甲醇、甲酸、乙酸乙酯、鹽酸均為分析純。
　　二、測定步驟及結(jié)果
　　馬兜鈴酸Ⅰ和馬兜鈴酸Ⅱ在馬兜鈴科植物中的含量相對較高，二者被認為是馬兜鈴屬以及細辛屬植物產(chǎn)生毒素、致癌的重要因素。在進行待測材料的測定前先完成馬兜鈴酸Ⅰ對照品溶液的制備。精密稱定馬兜鈴酸I對照品，用無水乙醇配置濃度分別為0.03，0.025，0.02，0.015，0.01，0.005mg/mL的對照品溶液，檢測波長為390nm，用紫外可見分光光度計測定此時的吸光度，并以馬兜鈴酸Ⅰ的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標繪制曲線，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在該范圍內(nèi)，馬兜鈴酸Ⅰ的濃度與其吸光度具有良好的線性關(guān)系。
　　在進行供試品溶液的制備時，取適量藥材生品粉末，精密稱定0.3g。為優(yōu)化馬兜鈴總酸的提取條件，可采用正交試驗法，即用正交表安排與分析多種因素試驗，在馬兜鈴總酸的測定中，主要考察提取溶劑的濃度、溶劑的用量以及提取的方法，以馬兜鈴總酸含量為參考指標安排正交試驗：溶劑有濃度2.5%的氨水、濃度5%的氨水、濃度7.5%的氨水三種，溶劑的用量有40mL、50mL、60mL三種，提取的方法有冷浸過夜、超聲提取15min、超聲提取15min×2三種。稱重并補足重量，濾過，取續(xù)濾液10mL，以6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值為2，加乙酸乙酯10mL進行4次萃取，合并有機層并用20mL水洗至中性，回收溶劑，加無水乙醇溶解殘渣，定容至10mL，精密吸取2mL，用無水乙醇定容至5mL。由多次重復試驗的結(jié)果分析，以60mL濃度為7.5%的氨水采用冷浸過夜的方法提取的效果最佳，且在馬兜鈴酸總酸含量的影響因素中，提取方法產(chǎn)生的影響較大，差異極為顯著，其次是溶劑的用量，差異較為顯著，而不同濃度的溶劑之間不存在顯著差異。
　　經(jīng)過上述試驗分析，對馬兜鈴總酸的最優(yōu)提取方法，以青木香為例，精密稱定青木香生品粉末，過四號篩，加入60mL濃度為7.5%的氨水，經(jīng)冷浸過夜，補足重量，取續(xù)濾液10mL，以6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值為2，加10mL乙酸乙酯進行4次萃取，合并有機層并用20mL水洗至中性，回收溶劑，加無水乙醇溶解殘渣，定容至10mL，精密吸取2mL，用無水乙醇定容至5mL。
　　對各類含馬兜鈴酸類中藥材的樣品測定采用上述最優(yōu)的提取方法，分別進行提取，并制成供試品溶液，重復測定5次計算出待測藥材中馬兜鈴總酸含量的平均值，以完成精密度試驗；同時進行重復性試驗，驗證方法的重復性是否良好；進行加樣回收率試驗，測出其平均回收率；在第0、2、6、12、24h測定含量的平均值，驗證其穩(wěn)定性。試驗數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0 軟件進行分析，檢測結(jié)果中，不同產(chǎn)地的含馬兜鈴酸類中藥材的馬兜鈴總酸含量為0.164%-0.734%，其中青木香的總酸含量為0.563%，馬兜鈴的總酸含量0.527%，關(guān)木通的總酸含量0.734%，遼細辛的總酸含量0.164%。
　　三、討論
　　本次試驗采用紫外分光光度法，對不同地區(qū)市售的幾種含馬兜鈴酸類中藥材的馬兜鈴總酸含量進行測定，以指導臨床治療中馬兜鈴酸類中藥材的應用。本次測定的藥材包括江蘇等地的青木香、陜西等地的馬兜鈴、吉林等地的關(guān)木通、東北等地的遼細辛。測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地的含馬兜鈴酸類中藥材的馬兜鈴總酸含量介于0.164%-0.734%之間，其中關(guān)木通的總酸含量最高，達到0.734%，遼細辛的總酸含量最低，為0.164%。
　　紫外分光光度法是一種較為常用的定量測定方法，定量測定時，在最大的吸收波長處，對一定濃度的樣品溶液的吸光度進行測量，并與待測溶液的吸光度進行比較，從而計算出待測溶液的濃度。此外，也可以采用吸收系數(shù)法求算。本次試驗所用的紫外分光光度計，是根據(jù)待測物質(zhì)的吸收光譜，對其結(jié)構(gòu)、成分以及物質(zhì)之間的相互作用進行研究的有效手段。紫外分光光度計的自動化程度較高，應用更加開放靈活，具有較強的兼容性，操作簡單，便于維護，因而具有較高的效率。基于本文所述的方法測定含馬兜鈴酸類中藥材馬兜鈴總酸的含量，能夠迅速得到準確的結(jié)果，從而為臨床的應用提供相應的數(shù)據(jù)參考。
　　參考文獻
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