比色法測定鐵皮石斛藥材中多糖的含量
發(fā)布時間:2019-08-29 來源: 美文摘抄 點擊:
摘 要:本文為了比較考察組培移栽和野生鐵皮石斛藥材中的多糖含量。以苯酚-濃硫酸法,多糖水解成單糖并脫水生成糖醛衍生物,與苯酚縮合成橙黃色化合物,在490nm處比色測定吸收度,并以葡萄糖為對照品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線測定樣品的多糖含量。標(biāo)準(zhǔn)曲線葡萄糖含量在0.0~100.0μg范圍內(nèi)線性良好,r =0.9998。組培移栽和野生鐵皮石斛藥材的多糖含量分別為13.11%和14.37%。 結(jié)構(gòu)表明苯酚-濃硫酸法測定多糖準(zhǔn)確穩(wěn)定、簡便易行,組培移栽和野生的鐵皮石斛藥材多糖含量相當(dāng)。
關(guān)鍵詞:鐵皮石斛;多糖;含量測定
中圖分類號:S567.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A DOI:10.11974/nyyjs.20151131011
鐵皮石斛是一種名貴的具有養(yǎng)陰補益作用的中藥材!渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載,鐵皮石斛“補五臟虛勞羸瘦、強陰、久服厚腸胃。”《本草綱目》中評價鐵皮石斛“強陰益精,久服厚腸胃,補內(nèi)絕不足,平胃氣,長肌肉,輕身延年......!2010年版《中國藥典》記載其功能與主治為“益胃生津,滋陰清熱。用于陰傷津虧,口干煩渴,食少干嘔,病后虛熱,目暗不明!
由于鐵皮石斛野生藥材來源稀少,不能滿足市場需求,現(xiàn)組培繁殖移栽的種植方法發(fā)展很快。由于鐵皮石斛中的多糖是主要的活性成分,為更好地了解和控制藥材品質(zhì),本文對組培移栽和野生的鐵皮石斛藥材樣品的多糖含量進(jìn)行了比較考察。
1 儀器與試藥
儀器:UV-1900 紫外-可見分光光度計,sartorius BS110S電子分析天平(德國);試劑:硫酸,無水乙醇,苯酚均為分析純;對照品:無水葡萄糖(HPLC法含量98.82%),使用前于105℃恒溫烘干至恒重;樣品:組培移栽樣品由學(xué)院相關(guān)老師提供,野生藥材樣品購自金華市九德堂藥店
2 方法與結(jié)果
2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
2.1.1 對照品貯備液的制備
精密稱取0.1012g葡萄糖對照品于100mL燒杯中,加水溶解,定容至1000mL容量瓶中,搖勻,即得葡萄糖對照品貯備液(100μg·mL-1)。
2.1.2 對照品溶液的制備及比色測定
分別吸取0、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL的葡萄糖對照品貯備液(100μg·mL-1)置20mL具塞試管中,用蒸餾水補至1.0mL,分別得到質(zhì)量濃度為0、20、40、60、80和100μg·mL-1的系列對照品溶液。向各溶液中加入1.0mL苯酚溶液(5%),然后快速加入5.0mL濃硫酸(于液面垂直加入,勿接觸試管壁,以便與反應(yīng)液充分混合),靜置10min,振搖使反應(yīng)液充分混合,沸水浴中加熱15min,冷水冷卻至室溫,在490nm處測定吸光度。
2.1.3 線性關(guān)系考察
以葡萄糖質(zhì)量濃度C為橫坐標(biāo),吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo),制定標(biāo)準(zhǔn)曲線,并作線性回歸,得到吸光度A與質(zhì)量濃度C的回歸方程為:A=0.0070C+ 0.0022, r= 0.9998(n=6),葡萄糖濃度在0~100μg范圍內(nèi)線性良好。見圖1。
2.2 樣品的測定
2.2.1 供試品溶液的制備
取烘干后樣品0.lg,加入80%乙醇10mL,回流1h,過濾。收集藥渣,往其中再次加入80% 乙醇,重復(fù)上述步驟2次,以去除樣品中可能含有的甙類等干擾性成分。乙醇提取后的藥渣加入3mL 蒸餾水,沸水浴提取1h 后過濾,收集提取液,藥渣重復(fù)提取2次,合并3次所得提取液定容至10mL 后稀釋100 倍;取1mL置20mL具塞試管中,加苯酚試劑1mL 混勻,再加濃硫酸5mL,混勻,靜置5min,沸水浴中加熱15min,冷水冷卻至室溫,即得樣品溶液。
2.2.2 藥材樣品的多糖含量
上述樣品溶液于490nm 處比色測定吸收度,重復(fù)3次,同時作空白試驗。在葡萄糖對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品溶液的糖含量,并根據(jù)投料量、稀釋倍數(shù)計算藥材中的多糖含量。結(jié)果組培移栽的鐵皮石斛藥材中的多糖平均含量為13.11%,野生鐵皮石斛藥材的多糖平均含量為14.37%。
3 討 論
石斛這一藥材在2005年版和2010年版《中國藥典》中均有收載,其中在2010年版藥典中還增加了含量測定項目,規(guī)定石斛堿含量不少于0.40%,毛蘭素含量不少于0.03%[1]。這些特征性成分雖然對于控制藥材質(zhì)量有重要作用,但作者認(rèn)為多糖是鐵皮石斛中的主要有效成分。鐵皮石斛具有明顯的提高免疫功能的作用,這與多糖的基本活性是一致的。本文稿主要選取多糖指標(biāo)來考察組培移栽與野生藥材的品質(zhì)。
李滿飛等提出的苯酚-濃硫酸法測定多糖含量,在后來的相關(guān)研究中得到了廣泛的應(yīng)用[2]。本文研究結(jié)果表明組培移栽和野生鐵皮石斛藥材的多糖含量分別為13.11%和14.37%,2者相當(dāng)。說明組培移栽的方法種植鐵皮石斛以替代野生藥材是可行的,可以緩解野生鐵皮石斛藥材匱乏的問題。何鐵光等[3]經(jīng)測定野生鐵皮石斛1a生莖多糖含量為148. 94mg/g,多年生莖多糖含量為268. 21mg/g,提示本研究中所用的野生鐵皮石斛藥材是1a生的。
參考文獻(xiàn)
[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:85-87.
[2] 李滿飛,徐國鈞,平田正等.中藥石斛類多糖的含量測定[J].中草藥, 1990,21(10):10-12.
[3] 何鐵光,蘇江,王燦琴等.鐵皮石斛不同來源材料多糖和氨基酸含量的比較[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,38(1):32-34.
作者簡介:鄭柏勤(1966- ),男,副教授、高工,從事生物制藥教學(xué)與科研工作。
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