GAP基地與其他產(chǎn)地梔子藥材中西紅花苷-1含量的對(duì)比研究
發(fā)布時(shí)間:2019-08-26 來(lái)源: 美文摘抄 點(diǎn)擊:
[摘 要] 目的 以西紅花苷-1含量為指標(biāo),評(píng)價(jià)GAP基地梔子藥材的質(zhì)量,并與其他產(chǎn)地藥材進(jìn)行比較。方法 運(yùn)用HPLC法,色譜柱:Kromasil C18柱;流動(dòng)相:水-甲醇梯度洗脫(60:40至0:100);檢測(cè)波長(zhǎng):440nm;流速:1.0ml·min-1。結(jié)果 GAP藥材基地梔子中西紅花苷-1含量比其他產(chǎn)地的要高,含量波動(dòng)小。結(jié)論 GAP基地梔子藥材質(zhì)量好,且較穩(wěn)定,其他產(chǎn)地梔子藥材質(zhì)量不穩(wěn)定。
關(guān)鍵詞:GAP HPLC 梔子 西紅花苷-l
中圖分類號(hào):R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1672-5085(2007)7-0107-03
梔子為茜草科植物Gardenia jasminoides Eills的干燥成熟果實(shí),是傳統(tǒng)中藥,具瀉火除煩,清熱利尿,涼血解毒的功效[1]。梔子的主要有效成分為梔子苷、西紅花苷類[2,3],西紅花苷類是西紅花、梔子中共有的色素部分,在治療或預(yù)防心腦血管疾病及癌癥等方面具有明確的藥理效應(yīng)[4]。梔子生長(zhǎng)地區(qū)廣泛,主產(chǎn)于浙江、江西、湖北、湖南等地,不同地區(qū)產(chǎn)的梔子質(zhì)量參差不齊,本文通過(guò)對(duì)GAP基地及湖南、江西等不同產(chǎn)地梔子的西紅花苷-1含量進(jìn)行檢測(cè)并比較,為不同來(lái)源藥材的質(zhì)量控制提供一種可靠的方法,也為制劑生產(chǎn)廠家優(yōu)選貨源提供參考。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
日本島津高效液相色譜儀(LC-10AT泵,SPD-10A紫外檢測(cè)器);N2000色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息研究);KQ-250E型醫(yī)用超聲波清洗器(500W,40kHz),F(xiàn)A1104電子分析天平。
1.2 試劑
甲醇為色譜純;水為雙重蒸餾水(自制)。
1.3 樣品
規(guī)范化基地樣品采集于江西(樟樹、新干)GAP梔子種植基地,湖南不同產(chǎn)地樣品由當(dāng)?shù)剞r(nóng)民帶領(lǐng)采集,其它樣品均在各產(chǎn)地購(gòu)買。經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)周日寶教授鑒定均為茜草科植物Gardenia jasminoides Ellis的成熟果實(shí)。
1.4 對(duì)照品
西紅花苷-1(成都普思生物科技有限公司提供,純度>98%,HPLC)
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
色譜柱為kromasil C18柱(4.6×250mm,5µm);流動(dòng)相:水-甲醇梯度洗脫(60:40至0:100),洗脫時(shí)間60min;流速l.0ml·min-1;柱溫35℃;檢測(cè)波長(zhǎng)440nm;進(jìn)樣量20µl。此條件下供試品中西紅花苷-l與其他組分均能達(dá)到基線分離,西紅花苷-1保留時(shí)間為24.5 min(圖1、2)
2.2 供試品制備
將梔子藥材50℃減壓干燥24h,粉碎,過(guò)20目篩,精密稱取約0.1g,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇50ml,密塞,稱重,超聲處理30min,放冷,再稱重,用50%甲醇補(bǔ)足減少的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45µm)濾過(guò)。
2.3 線性關(guān)系考察
精密稱取一定量西紅花苷-l對(duì)照品分別溶于甲醇,配制成4.9、9.8、19.6、39.2、78.4、98µg·ml-1的對(duì)照品溶液,分別進(jìn)樣20µl,按上述色譜條件注入色譜儀,測(cè)定峰面積,平行測(cè)定3次,以峰面積A為縱坐標(biāo),西紅花苷-l濃度C(µg·m1-1)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立回歸方程為:Y=1.72×107C-6.80×103,r=0.9999(n=6)。結(jié)果表明:西紅花苷-l在4.9~98µg·ml-1的范圍內(nèi),其濃度與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2.4 精密度試驗(yàn)
準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液(19.6µg·ml-1)20µl,重復(fù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積。結(jié)果RSD為1.26%,說(shuō)明其精密度良好。
2.5 重復(fù)性試驗(yàn)
取湖南漣源樣品5分,分別按上述供試品制備法制備,并按上述色譜條件測(cè)定,記錄峰面積。結(jié)果RSD為1.18%,說(shuō)明其重現(xiàn)性良好。
2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取同一供試品溶液,分別在0,2,4,8,10h分別進(jìn)樣2Oµl,按上述色譜條件測(cè)定,記錄峰面積。結(jié)果RSD值為1.35%,結(jié)果表明,供試品溶液在10h之內(nèi)穩(wěn)定。
2.7 加樣回收率試驗(yàn)
精密稱取已測(cè)得含量的樣品0.05g,分別精密加入西紅花苷-l對(duì)照品溶液適量,揮干溶劑,按供試品制備方法制備供試液,測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。
2.8 供試品測(cè)定及結(jié)果
精密吸取對(duì)照品溶液與不同產(chǎn)地的供試品濾液各20µl,注入高效液相色譜儀,按上述色譜條件,以外標(biāo)法測(cè)定并計(jì)算樣品含量。結(jié)果見表2。
3 討論
分別考察了甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇4種比例溶劑的提取效果,結(jié)果表明,50%甲醇提取率最高,故選其作提取溶劑。提取方法分別考察了超聲提取與加熱回流兩種方式,提取效率相當(dāng),考慮到操作簡(jiǎn)便,故采用超聲提取。
從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看出,GAP基地產(chǎn)出的梔子藥材中西紅花苷-l含量都在1.18%以上,RSD最高1.01%,說(shuō)明質(zhì)量較好、穩(wěn)定,而其他產(chǎn)地產(chǎn)出梔子藥材中西紅花苷-l含量最高才1.14%,RSD從0.98%到2.48%,表明質(zhì)量較差,且波動(dòng)大,從一定程度上說(shuō)明建立GAP藥材生產(chǎn)基地能有效的提高并控制藥材的質(zhì)量。
參考文獻(xiàn)
[1] 中國(guó)藥典[S].一部.2005,173.
[2] 劉璇,錢之玉,付健.西紅花苷-l的高效液相色譜測(cè)定[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),1996,27(12):734.
[3] 曹敏,陳玉英.梔子藥材紅花苷類HPLC指紋圖譜的研究[J].中國(guó)新藥雜志,2003,12(7):553.
[4] 鄧穎,郭志剛,曾兆麟,等.藏紅花的藥理研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志,2002,27(8):565~568.
注:“本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內(nèi)容請(qǐng)以PDF格式閱讀原文”
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