HPLC法同時測定不同產(chǎn)地甘草藥材中甘草酸和甘草苷的含量
發(fā)布時間:2019-08-28 來源: 歷史回眸 點擊:
【摘要】目的:測定不同產(chǎn)地甘草藥材中甘草酸和甘草苷的含量。方法:采用HPLC法,檢測波長為237 nm,流動相為0.05%磷酸溶液-乙腈。結(jié)果:甘草苷和甘草酸的線性范圍分別為0.050~ 0.375 μg和0.40~3.00 μg,平均回收率分別為100.15%和98.76%。結(jié)論:所建HPLC方法操作簡便、準確、重復(fù)性好,可為不同產(chǎn)地甘草藥材的質(zhì)量評價提供依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法;甘草;甘草酸;甘草苷;含量測定
Determination of glycyrrhizic acid and liquiritin in
Glycyrrhizae radix et rhizoma by HPLC
Li Ru-Jie
(Pharmacy of Sichuan Orthopaedic Hospital, Chengdu 610041, China)
【Abstract】Objective: To establish an HPLC method for determining the contents of glycyrrhizic acid and liquiritin in Glycyrrhizae radix et rhizoma. Methods: The mobile phase was acetonitrile and water containing 0.05% phosphoric acid. The detection wavelength was set at 237nm. Results: The linear range of glycyrrhizic acid and liquiritin was 0.40~3.00 μg, 0.050~ 0.375 μg and the average recovery was 98.76%, 100.15%, respectively. Conclusion: The developed method is simple, accurate, and can provide a scientific basis for the quality evaluation of Glycyrrhizae radix et rhizoma.
【Key words】HPLC; Glycyrrhizae radix et rhizoma; Glycyrrhizic acid; Liquiritin; Content determination
【中圖分類號】R285.5【文獻標識碼】A【文章編號】2095-6851(2014)06甘草始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,列為上品!吨袊幍洹2010年版規(guī)定甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根莖[1]。甘草味甘、平,具有補脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、調(diào)和諸藥的功效,臨床上多用于治療脾胃虛弱、倦怠乏力、心悸氣短、四肢攣急疼痛等癥[1]。
甘草主要含三萜皂苷和黃酮類成分,如甘草酸、甘草苷、甘草素等[2-3],F(xiàn)代研究表明,甘草酸和甘草苷是甘草中主要的生物活性物質(zhì),甘草酸具有抗炎、保肝、抗腫瘤等作用[4],甘草苷能抗抑郁、保護神經(jīng)細胞,并對肝臟毒性有明顯的保護作用[5]。本文采用HPLC法測定了不同產(chǎn)地甘草藥材中甘草酸和甘草苷的含量,為甘草藥材的質(zhì)量評價提供了參考依據(jù)。
1儀器與試藥
美國Agilent 1260高效液相色譜儀;CQ-250超聲波清洗器(上海必能信有限公司);Sartorius BP121s電子天平 (北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)。乙腈為色譜純(Fisher),水為超純水,乙醇、磷酸等試劑均為分析純。甘草苷對照品(批號:111610-200604)和甘草酸銨對照品(批號:0731-9704)均購自中國藥品生物制品檢定所。本文共收集了10批甘草藥材,主要產(chǎn)于內(nèi)蒙古、新疆、甘肅和寧夏等地。
2方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
Zorbax SB-C18色譜柱(4.6 mm × 150 mm, 5 μm);檢測波長:237nm;柱溫:30 ?C;流速:1.0 mL/min;進樣量:10 μL;流動相:A相為0.05%磷酸溶液,B相為乙腈,進行梯度洗脫,洗脫程序為:0~8 min, 19%~19% B;8~35 min, 19%~50% B;35~36 min, 50%~100% B;36~40 min, 100%~19% B。
2.2 對照品溶液的制備
取甘草苷對照品、甘草酸銨對照品適量,精密稱定,加70%乙醇制成每1ml含甘草苷25μg、甘草酸銨0.2mg的混合對照品溶液,即得(甘草酸重量 = 甘草酸銨重量/1.0207)。
2.3 供試品溶液的制備
取本品粉末約0.2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇100ml,密塞,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用70%乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
2.4 線性關(guān)系考察
取甘草苷、甘草酸銨對照品適量,精密稱定,加70%乙醇制成每1ml含甘草苷25μg、甘草酸銨0.2mg的混合對照品溶液。再分別精密吸取2、3、5、8、10、15μL混合對照品溶液,注入液相色譜儀,測定峰面積。以對照品進樣量(μg)為橫坐標,相應(yīng)的峰面積為縱坐標繪制標準曲線。結(jié)果甘草苷的回歸方程為Y = 2426.7 X - 0.1355(r = 0.9999),線性范圍為0.050~ 0.375 μg;甘草酸的回歸方程為Y = 443.54 X - 1.3603(r = 0.9999),線性范圍為0.40~3.00 μg。
2.5 方法學(xué)考察
2.5.1 精密度試驗
精密吸取同一混合對照品溶液10 μL,按上述色譜條件,連續(xù)進樣6次,記錄色譜峰面積,結(jié)果甘草苷、甘草酸峰面積的RSD分別為1.18%、1.45%,表明儀器精密度良好。
2.5.2穩(wěn)定性試驗
取同一供試品溶液,于制備后0、1、2、4、8、12 h進行測定,記錄峰面積,計算2種成分的峰面積RSD。結(jié)果甘草苷和甘草酸峰面積的RSD分別為1.58%、2.06%,表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.5.3重復(fù)性試驗
取同一批樣品粉末約0.2 g,共6份,精密稱定,按上述供試品溶液制備方法分別制備供試品溶液。在上述色譜條件下,依法測定,計算甘草苷和甘草酸的含量。結(jié)果甘草苷和甘草酸含量的RSD分別為2.08%、2.26%,表明該方法重復(fù)性良好。
2.5.4加樣回收試驗
取同一批已知含量的甘草樣品粉末9份,每份約0.1 g,精密稱定,分別按已知含量的80%,100%,120%三個水平加入對照品,再按上述供試品溶液制備方法制備供試品溶液,在上述色譜條件下測定甘草苷和甘草酸的含量,計算回收率。結(jié)果甘草苷的平均回收率為100.15%,RSD為2.07%;甘草酸的平均回收率為98.76%,RSD為1.72%。
2.6 樣品含量測定
分別取不同產(chǎn)地的甘草藥材粉末約0.2g,精密稱定,按上述供試品溶液制備方法制備供試品溶液。精密吸取各供試品溶液10μL,注入高效液相色譜儀,依法測定,計算甘草苷和甘草酸的含量。對照品及甘草供試品溶液的HPLC色譜圖見圖1,含量測定結(jié)果見表1。
圖1 對照品(A)和甘草供試品(B)的HPLC圖譜
表1不同產(chǎn)地甘草藥材中甘草苷和甘草酸的含量測定結(jié)果(n=3)
編號藥材
產(chǎn)地甘草苷
含量(%)甘草酸
含量(%)編號藥材
產(chǎn)地甘草苷
含量(%)甘草酸
含量(%)1內(nèi)蒙古
和林格爾1.244.126內(nèi)蒙古
依克昭盟1.143.982內(nèi)蒙古
鄂爾多斯1.093.517新疆吉
木薩爾0.853.863新疆
和靜0.984.068甘肅
慶城1.052.764甘肅
隴西0.752.989寧夏
鹽池0.823.385寧夏0.813.2410甘肅
酒泉0.683.05
3討論
在供試品溶液制備時,考察了乙醇、70%乙醇、50%乙醇、甲醇、70%甲醇溶劑的提取效率,結(jié)果70%乙醇對兩個成分的提取效果最佳;考察了不同提取方法(超聲、冷浸和水浴回流),結(jié)果超聲比回流、冷浸提取的效率更高。此外,還對提取時間、提取次數(shù)、溶媒用量等參數(shù)進行了考察,最終確定了最佳的供試品溶液制備方法。 《中國藥典》2010年版“甘草”項下規(guī)定:按干燥品計算,甘草藥材含甘草苷不得少于0.50%,甘草酸不得少于2.0%。本文研究發(fā)現(xiàn),產(chǎn)于內(nèi)蒙古、新疆、甘肅和寧夏等地的10批藥材中甘草苷和甘草酸的含量均符合規(guī)定,表明收集的甘草藥材質(zhì)量均合格。其中,產(chǎn)于內(nèi)蒙古和林格爾縣的甘草藥材中的甘草苷(含量為1.53%)和甘草酸(含量為4.12%)含量最高,而來自于甘肅酒泉的甘草藥材中的甘草苷含量最低,為0.68%。
參考文獻
。1]中華人民共和國藥典一部[S]. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010,80.
[2]李薇,宋新波,張麗娟,等. 甘草中化學(xué)成分研究進展[J]. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2012,14(7):40-44.
[3] 陶晡,劉曉清,屈振剛. 甘草化學(xué)成分研究進展[J]. 河北農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,13(3):77-79.
。4]韓瑤聃,王彬,王政雨,等. 甘草酸藥理作用的研究進展[J]. 中國新藥雜志,2012,21(21):2499-2505.
[5]馮月,吳文夫,魏建華,等. 甘草酸及甘草苷的提取純化方法和藥理作用研究進展[J]. 人參研究,2012,3:46-50.
相關(guān)熱詞搜索:甘草 測定 藥材 產(chǎn)地 含量
熱點文章閱讀