建立黃芪藥材中黃酮類成分HPLC指紋圖譜的方法
發(fā)布時(shí)間:2019-08-28 來(lái)源: 歷史回眸 點(diǎn)擊:
【摘要】 目的 就建立黃芪藥材中黃酮類成分HPLC指紋圖譜的方法進(jìn)行探討。方法 采用HPLC法建立黃芪中黃酮類成分指紋圖譜。結(jié)果 對(duì)照品在0.0834-1.5012μg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系;厥章省⑵骄厥章、RSD都較高。除了樣品2(山西大同)和樣品10(陜西旬邑)外,其它各批的相似度均大于O.94。結(jié)論 本文所選用的方法回收率好、操作簡(jiǎn)便,同時(shí)專屬性較強(qiáng),可以對(duì)黃芪藥材中黃酮類成分的質(zhì)量更好地控制。
【關(guān)鍵詞】 黃芪藥材;黃酮類成分;HPLC指紋圖譜
黃芪為補(bǔ)氣中藥,有補(bǔ)氣升陽(yáng)、益衛(wèi)固表,托毒排膿和益氣利水作用。產(chǎn)于內(nèi)蒙古、山西、甘肅、黑龍江等地。春秋采挖,除去須根、根頭,曬干。切片,生用或蜜炙用。黃芪性微溫、味甘,含多種微量元素(銅、鋅、硒等)、多種葉酸、氨基酸、多糖、蔗糖、皂甙,可以利尿消腫、補(bǔ)肺固表、補(bǔ)脾益氣,可以有效地調(diào)節(jié)血糖含量、增強(qiáng)心肌收縮力、抗應(yīng)激、抗衰老、抗菌、降壓、利尿,主治肢體麻木、貧血萎黃、氣血不足、臟器下垂、中氣下陷、咳喘短氣、肺氣虛弱、氣虛自汗、脾胃氣虛等??[1]?。為了控制其質(zhì)量,通過(guò)研究,并參照有關(guān)文獻(xiàn)??[2]?,用HPLC指紋圖譜法測(cè)定黃芪藥材中黃酮類成分,方法簡(jiǎn)便可行,準(zhǔn)確可靠??[3]?。
1 儀器與試藥
1.1 儀器 Agilengt1260高效液相色譜儀(LC2000)、AUW-220D電子分析天平(日本島津)、A4DL型自動(dòng)純水蒸餾器(廣州恒廣科學(xué)儀器有限公司)、DSQ10260超聲儀(上海亞榮生化儀器廠)、自動(dòng)進(jìn)樣器、UV2401-PC紫外分光光度計(jì)(日本島津)、RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。
1.2 試藥 黃芪藥材均采集于全國(guó)各地,按照產(chǎn)地不同分為十批次;乙腈為色譜純,水為重蒸餾水,其余試劑為分析純??[4]?。
2 方法與結(jié)果
2.1 供試品溶液及陰性對(duì)照溶液的制備 取6.0g黃芪將其研細(xì),然后進(jìn)行精密稱定,稱定之后將其置于瓶中,加入40ml含量為70%的乙醇。然后加熱回流3小時(shí),放冷,濾過(guò)放于量瓶中(容量為100ml)。再分別對(duì)殘?jiān)腿萜鬟M(jìn)行洗滌,洗液并入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,搖勻。精密量取1ml置10ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。另取缺黃芩的其他味藥按處方工藝制成陰性制劑,按上述方法制備陰性對(duì)照溶液??[5]?。
2.2 線性關(guān)系考察 取在60℃減壓干燥4小時(shí)的對(duì)照品約10mg,精密稱定,置100ml棕色量瓶中,加甲醇適量,振搖使完全溶解后,稀釋至刻度,搖勻。分別進(jìn)樣1、2、4、6、8、10、12、14、16、18μl,記錄峰面積,以峰面積積分值(Y)對(duì)對(duì)照品濃度(X)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程:Y=5827.96835X-42.05934,r=0.9999。結(jié)果表明,對(duì)照品在0.0834-1.5012μg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系??[6]?。
2.3 色譜條件 流動(dòng)相選用比例為53:47:0.2的甲醇-水-磷酸,流速0.6ml/min;填充劑選用十八烷基硅烷鍵合硅膠,檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm,柱溫控制在35℃??[6]?。
2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 取黃芪藥材樣品粉末(50目)約1.5g,進(jìn)行供試品的制備,采用上述色譜條件,進(jìn)樣20μL,連續(xù)進(jìn)樣6針,并以5號(hào)峰作為參照峰,結(jié)果各峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD(n=6)均小于2%。
2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 在室溫條件下,取供試品溶液分別在0,2,4,6,8,10,12h各進(jìn)樣10μl,(放置0小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)、10小時(shí)、12小時(shí),然后各進(jìn)樣10μl),得出試驗(yàn)結(jié)果:n=7,RSD為:0.9%,平均峰面積為:2714238,這些數(shù)據(jù)充分表明在12h內(nèi),樣品的穩(wěn)定性良好。
2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批黃芪藥材樣品粉末(50目)約1.5g,平行稱定5份進(jìn)行供試品的制備,采用上述的色譜條件,進(jìn)樣20μL,結(jié)果各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)保留峰面積的平均值的RSD均小于3%。
2.7 回收率試驗(yàn) 回收率試驗(yàn)采用加樣回收法,取100g黃芪藥材,然后對(duì)其進(jìn)行認(rèn)真地研細(xì),研細(xì)之后稱取樣品18g,分為6份,每份3g。然后加入5ml含量為0.2055mg.ml??-1?的對(duì)照品儲(chǔ)備液,按照(3)的方法進(jìn)行提取,制成供試品溶液。然后計(jì)算回收率、平均回收率等,見(jiàn)表1,可見(jiàn)回收率、平均回收率、RSD都較高。
2.8 指紋圖譜中峰面積相似度計(jì)算 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,10批不同產(chǎn)地黃芪藥材的相似度在0.826-0.990之間,除了樣品2(山西大同)和樣品10(陜西旬邑)外,其它各批的相似度均大于0.94,見(jiàn)表2。3 討 論
3.1 本實(shí)驗(yàn)建立黃芪中活性成分黃酮類成分HPLC指紋圖譜,為了提高黃酮類成分的溶解度和純度,實(shí)驗(yàn)對(duì)其提取工藝進(jìn)行了反復(fù)的摸索與優(yōu)化??[7]?。
3.2 本文所選用的方法回收率好、操作簡(jiǎn)便,同時(shí)專屬性較強(qiáng),可以對(duì)黃芪藥材中黃酮類成分的質(zhì)量更好地控制。
參考文獻(xiàn)
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