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免疫室SOP作業(yè)指導書

發(fā)布時間:2020-11-10 來源: 精準扶貧 點擊:

 1

 主題內(nèi)容 乙型肝炎病毒表面抗原定量測定

 一、目的:規(guī)范 乙型肝炎病毒表面抗原 測定的標準操作程序,確保 乙型肝炎病毒表面

 抗原 測定的結(jié)果準確有效。

 二、適用范圍:在 AutoLumo A2000 化學發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒

 表面抗原 。

 三、臨床意義

  乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病,據(jù)估計全球范圍內(nèi)目前

 大約有 3 億乙肝病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝

 臟疾病,流行病學研究已經(jīng)清楚地表明乙肝病毒與肝細胞癌的發(fā)生有聯(lián)系。

 HBsAg 是乙肝病毒顆粒(HBV)的外殼成分,為大小不一的多肽。感染乙

 型肝炎病毒后,機體會產(chǎn)生各種不同模式的抗原、抗體血清學免疫應答反應。

 通過檢測這些標志物,不僅可以診斷感染,而且還可以判斷疾病的進程和預

 后。HBsAg 是 HBV 感染后第一個標志物,是提示樣本是否有潛在傳染性的最

 好的間接指標。

 四、方法原理

  本產(chǎn)品采用雙抗體夾心法原理進行檢測。用抗-HBs 抗體包被磁微粒,用

 辣根過氧化物酶標記的抗-HBs 抗體制備酶結(jié)合物。通過免疫反應形成抗體-

 抗原-抗體-酶復合物,該復合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子,發(fā)光強度與 HBsAg

 含量成正比。

 五、標本的采集與處理

 5.1.

 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本,推薦對于使用普通管采血的樣

  本,離心前樣本應 37℃孵育至少 1h;對于使用促凝管采血的樣本,離

  心前樣本應 37℃孵育至少 0.5h,離心條件 10000g/min,10min;對于使

  用抗凝管采血的樣本,離心條件 10000g/min,10min?鼓芡扑]使用

  肝素作為抗凝劑,避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。

  5.2.

 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結(jié)果,應離心除去,并確定樣

 本未變質(zhì)方可使用。

 2

  5.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測定。

  5.4.

 樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時;如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣

 本放置在 2~8℃的冰箱中;若需 48 小時以上保存或運輸,則應凍存于

 -20℃以下,避免反復凍融。使用前恢復到室溫,輕輕搖動混勻。

  5.5.避免反復凍融。使用前恢復到室溫,輕輕搖動混勻。

 六、標本拒收標準

 1)嚴重溶血、脂血

 2)標本標識不明

 七、儀器與材料

 7.1.儀器:AutoLumo A2000 化學發(fā)光檢測儀

  7.2.試劑:AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒表面抗原 試劑

 7.2.1.試劑準備:本試劑為即用型試劑,可以直接放在儀器上。

  7.2.2.試劑盒于 2~8℃儲存,有效期 12 個月。

  7.2.3.試劑盒應防止冷凍,避免強光照射。

  7.2.4.試劑盒開啟使用后,2~8℃保存可使用 1 個月。

  7.2.5.試劑盒可適應 1 周內(nèi)常溫運輸,運輸過程中應輕拿輕放,避免重壓,防止雨雪淋濕和陽光曝曬。

 7.2.6.試劑機載穩(wěn)定性

 7.2.6.1. 試劑包(磁微粒混懸液、酶結(jié)合物)豎直向上存放,

  在 2 ~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后,才可上機使

  用。首次使用后,機載或在 2 ~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期

  為 28 天。

  7.2.6.2. 校準品開瓶后保存于2~8°C,穩(wěn)定期可維持1個月;

 若需使用更長時間,應根據(jù)需要進行分裝,于-20℃

 凍存(可以保存2個月),但應避免反復凍融。

 八、檢驗方法

 8.1. 消耗品檢查:

  8.1.1.

 根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。

  8.1.2. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

 3

  8.2. 試劑包裝載:

  8.2.1. 試劑包首次上機前,輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成

  份,避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。

  8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。

  8.2.3. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼,可以手工輸入。

  8.2.4. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

  8.3. 測試:

 8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中,每次測試樣本量為 150µl。

 8.3.2. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入樣本信息。

 8.3.3. 選擇“運行”開始測試,系統(tǒng)自動進行試驗操作。

 8.3.4. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

 8.4. 定標:

 8.4.1. 儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數(shù)。

 8.4.2. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡,可以手工輸入。

 8.4.3. 將校準品轉(zhuǎn)移至樣本容器,放置在儀器配套樣本架中。

 8.4.4. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入定標信息。

 8.4.5. 選擇“運行”開始測試,生成定標曲線。

 8.4.6. 定標曲線有效期為 28 天。

 8.4.7. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

 8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要進行定標曲線的重新生成:

 8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復測定后仍然超出范圍;

 8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改;

 8.4.8.3. 超出定標曲線的有效期限;

 8.4.8.4. 儀器重要部件更換或維修。

 8.5. 質(zhì)控:

  8.5.1. 使用至少兩個分析物水平的質(zhì)控品進行質(zhì)控。

  8.5.2. 出現(xiàn)以下情況需要進行質(zhì)控:

 8.5.2.1. 測試試劑盒使用超過 24 小時;

 8.5.2.2. 更換新的試劑盒;

 4

 8.5.2.3. 重新生成定標曲線;

 8.5.2.4. 停機。

 8.5.3. 各實驗室需根據(jù)自身情況建立適合本實驗室的可接受范圍,以確

 保合適的測試性能。

 8.5.4. 質(zhì)控值應落在規(guī)定的范圍內(nèi),如出現(xiàn)失控,應采取糾正措施。

  8.6. 稀釋

  8.6.1. 使用手工稀釋或儀器自動稀釋功能,儀器自動稀釋的最大比例為

  1:100。

  8.6.2. 手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進行稀釋,將得到的檢測結(jié)果

  乘以稀釋倍數(shù)計算最終結(jié)果。

 8.6.3. 選擇儀器自動稀釋功能,可以得到準確的檢測結(jié)果,參考相應的儀

  器系統(tǒng)操作說明以及幫助系統(tǒng)。

 8.6.4. 稀釋后的樣本含量應不低于 0.05IU/ml。

 8.7.結(jié)果計算:

  選擇適當?shù)那擬合方式,本試劑盒推薦采用四參數(shù)擬合方式,以校

 準品濃度值為 x 軸,以校準品發(fā)光強度 log 值為 y 軸建立定標曲線。根據(jù)

 待測樣本的發(fā)光強度值回算相應的濃度值。儀器自動操作系統(tǒng)可通過存儲

 的定標曲線以及樣本測試得到的發(fā)光值自動計算樣本測試結(jié)果。

 九、參考范圍

 檢測 1040 例樣本,用 ROC 曲線方法確定正常參考值為<0.05IU/ml;

  建議各實驗室根據(jù)自己實際條件及接觸人群建立正常參考值。本試劑盒

  僅作為診斷的輔助手段之一,供臨床醫(yī)生參考。

 十、檢驗結(jié)果的解釋

  10.1.

 用本試劑盒檢測結(jié)果濃度值為 0.04~0.06IU/ml 的弱反應性可疑樣本,

  建議復孔重新測定,如果雙孔復查濃度值均小于 0.05IU/ml,結(jié)果判為

  陰性,如果單份或雙份測定不低于 0.05IU/ml,結(jié)果判為有反應性,有

  條件的實驗室建議做中和確證實驗,同時動態(tài)觀察。

 10.2. 本試劑盒測定范圍為 0.05~250IU/ml,濃度值大于 250IU/ml 的樣本,

 其結(jié)果是通過定標曲線外延得出的計算結(jié)果。如果要獲得其更準確的結(jié)

 5

 果,需對樣本進行稀釋后重新測定,推薦稀釋比例為 1/500,使用系統(tǒng)

 通用樣品稀釋液進行稀釋。稀釋后仍超出線性范圍的建議手工稀釋并增

 大稀釋比例。

 10.3. 由于方法學或免疫特異性等原因,使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣

 本進行檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果,因此不同試劑檢測所得結(jié)果

 不應直接相互比較,以免造成錯誤的醫(yī)學解釋,建議實驗室在檢測報

 告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中,如果改變試劑類型,則應進行

 額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進行平行比較以重新確定基線

 值。

 十一、檢驗方法的局限性

  11.1. 本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一,臨床診斷應與臨床檢查、病史

 及其他檢測相結(jié)合。

 11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風濕因子會干擾檢測結(jié)果。此類樣本不適合

 用本試劑盒進行檢測。

 11.3. 溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結(jié)果。

 十二、產(chǎn)品性能特征

  12.1. 陰性參考品符合率:檢測國家陰性參考品 20 份,不出現(xiàn)假陽性。

 12.2.

 陽性參考品符合率:檢測國家陽性參考品 3 份,不出現(xiàn)假陰性。

  12.3. 最低檢出量:用國家靈敏度參考品進行檢測,符合相應參考品要求。

 12.4. 精密性:10 孔平行檢測濃度值為 0.5IU/ml 樣本,CV%≤15.0%;10

 孔平行檢測濃度值為 1.5IU/ml 樣本,CV%≤10.0%。

 12.5. 線性:在 0.05IU/ml~250IU/ml 范圍內(nèi),線性相關(guān)系數(shù)(r)不低于

  0.9900。

 12.6. 分析特異性:與抗-HIV(1+2)、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗體無

 交叉反應。2.5mg/ml 血紅蛋白、200mg/L 膽紅素、20g/L 甘油三酯和

 500mg/dl 膽固醇對檢測結(jié)果無顯著干擾。

  十三、參考文獻

 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines:chronic hepatitis B.

 Hepatology, 2004, 34: 1225-1241.

  2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and

 6 current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11:

 97-107.

  3.巴德年,1998 年.當代免疫學技術(shù)與應用.北京醫(yī)科大學中國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)

  合出版社.

  4.陶義訓, 1997 年第二版,免疫學與免疫學檢驗.人民衛(wèi)生出版社.

  5.中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會. 病毒性肝炎防治方案. 中華傳染病雜志, 2001, 19:56-62.

  主題內(nèi)容 乙型肝炎病毒表面抗體定量測定

 一、 目的:規(guī)范 乙型肝炎病毒表面抗體 測定的標準操作程序,確保 乙型肝炎病毒表面

 抗體 測定的結(jié)果準確有效。

 二、 適用范圍:在 AutoLumo A2000 化學發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒

 表面抗體 。

 三、臨床意義

  乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病,據(jù)估計全球范圍內(nèi)目前

 大約有 3 億乙肝病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝

 臟疾病,流行病學研究已經(jīng)清楚地表明乙肝病毒與肝細胞癌的發(fā)生有聯(lián)系。

 表面抗體(Anti-HBs)是一種保護性抗體,是乙肝感染后痊愈或趨向治愈

 的象征;全程(3 針)疫苗接種結(jié)束后 1 個月檢測保護性表面抗體(Anti-HBs)

 的濃度,能夠判定免疫效果。關(guān)于表面抗體與保護力的關(guān)系,世界標準未完

 全統(tǒng)一,目前普遍認為普通人群表面抗體濃度值≥10mIU/ml,就有足夠的保

 護作用;高危人群表面抗體濃度值≥100mIU/ml,具有足夠的保護作用。肝

 移植、血液透析及免疫抑制等病人定期檢測表面抗體濃度值,每次檢測值≥

 100mIU/ml 為宜。

 四、方法原理

 7

  本產(chǎn)品采用雙抗原夾心法原理進行檢測。用表面抗原包被磁微粒,用辣

 根過氧化物酶標記表面抗原制備酶結(jié)合物。通過免疫反應形成抗原-抗體-酶

 標抗原復合物,該復合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子,發(fā)光強度與表面抗體的含

 量成正比。

 五、標本的采集與處理

 5.1.

 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本,推薦對于使用普通管采血的樣

  本,離心前樣本應 37℃孵育至少 1h;對于使用促凝管采血的樣本,離

  心前樣本應 37℃孵育至少 0.5h,離心條件 10000g/min,10min;對于使

  用抗凝管采血的樣本,離心條件 10000g/min,10min。抗凝管推薦使用

 肝素鈉作為抗凝劑,避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。

 5.2.

 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結(jié)果,應離心除去,并確定樣

  本未變質(zhì)方可使用。

  5.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測定。

 5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時;如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣

 本放置在 2~8℃的冰箱中;若需 48 小時以上保存或運輸,則應凍存于

 -20℃以下,避免反復凍融。使用前恢復到室溫,輕輕搖動混勻。

 六、標本拒收標準

 1)嚴重溶血、脂血

 2)標本標識不明

 七、儀器與材料

 7.1.儀器:

 適用于 AutoLumo A2000 化學發(fā)光檢測儀。

 7.2.試劑:AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒表面抗體 試劑

 7.2.1.試劑準備:本試劑為即用型試劑,可以直接放在儀器上。

  7.2.2.試劑盒于 2~8℃儲存,有效期 12 個月。

  7.2.3.試劑盒應防止冷凍,避免強光照射。

  7.2.4.試劑盒開啟使用后,2~8℃保存可使用 1 個月。

  7.2.5.試劑盒可適應 1 周內(nèi)常溫運輸,運輸過程中應輕拿輕放,避免重壓,防止雨雪淋濕和陽光曝曬。

 7.2.6.試劑機載穩(wěn)定性

 7.2.6.1. 試劑包(磁微;鞈乙、酶結(jié)合物)豎直向上存放,

 8

  在 2 ~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后,才可上機使

  用。首次使用后,機載或在 2 ~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期

  為 28 天。

 7.2.6.2. 校準品開瓶后保存于2~8°C,穩(wěn)定期可維持1個月;若

  需使用更長時間,應根據(jù)需要進行分裝,于-20℃凍

 存(可以保存2個月),但應避免反復凍融。

 八、檢驗方法

  8.1. 消耗品檢查:

 8.1.1. 根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。

 8.1.2. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

  8.2. 試劑包裝載:

 8.2.1. 試劑包首次上機前,輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成

 份,避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。

 8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。

 8.2.3. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼,可以手工輸入。

 8.2.4. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

  8.3. 測試:

 8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中,每次測試樣本量為 50µl。

 8.3.2. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入樣本信息。

 8.3.3. 選擇“運行”開始測試,系統(tǒng)自動進行試驗操作。

 8.3.4. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

 8.4. 定標:

 8.4.1. 儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數(shù)。

 8.4.2. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡,可以手工輸入。

 8.4.3. 將校準品轉(zhuǎn)移至樣本容器,放置在儀器配套樣本架中。

 8.4.4. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入定標信息。

 8.4.5. 選擇“運行”開始測試,生成定標曲線。

 8.4.6. 定標曲線有效期為 28 天。

 8.4.7.

 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

 9

 8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要進行定標曲線的重新生成:

  8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復測定后仍然超出范圍;

 8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改;

 8.4.8.3. 超出定標曲線的有效期限;

 8.4.8.4. 儀器重要部件更換或維修。

 8.5. 質(zhì)控:

  8.5.1. 使用至少兩個分析物水平的質(zhì)控品進行質(zhì)控。

  8.5.2. 出現(xiàn)以下情況需要進行質(zhì)控:

  8.5.2.1. 測試試劑盒使用超過 24 小時;

  8.5.2.2. 更換新的試劑盒;

  8.5.2.3. 重新生成定標曲線;

  8.5.2.4.

 停機。

  8.5.3. 各實驗室需根據(jù)自身情況建立適合本實驗室的可接受范圍,以確保

  合適的測試性能。

  8.5.4. 質(zhì)控值應落在規(guī)定的范圍內(nèi),如出現(xiàn)失控,應采取糾正措施。

  8.6. 稀釋

  8.6.1. 使用手工稀釋或儀器自動稀釋功能,儀器自動稀釋的最大比例為

 1:100。

  8.6.2. 手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進行稀釋,將得到的檢測結(jié)果

  乘以稀釋倍數(shù)計算最終結(jié)果。

 8.6.3. 選擇儀器自動稀釋功能,可以得到準確的檢測結(jié)果,參考相應的儀

  器系統(tǒng)操作說明以及幫助系統(tǒng)。

 8.6.4. 稀釋后的樣本含量應不低于 5mIU /ml。

 8.7.結(jié)果計算:

  選擇適當?shù)那擬合方式,本試劑盒推薦采用四參數(shù)擬合方式,以校

 準品濃度值為 x 軸,以校準品發(fā)光強度 log 值為 y 軸建立定標曲線。根據(jù)

  待測樣本的發(fā)光強度值回算相應的濃度值。儀器自動操作系統(tǒng)可通過存儲

 的定標曲線以及樣本測試得到的發(fā)光值自動計算樣本測試結(jié)果。

 九、參考范圍

 10

 正常參考值:<10mIU/ml

  建議各實驗室根據(jù)自己實際條件及接觸人群建立正常參考值。本試劑盒

 僅作為診斷的輔助手段之一,供臨床醫(yī)生參考。

 十、檢驗結(jié)果的解釋

  10.1.

 用本試劑盒檢測結(jié)果濃度值為 8.0~12.0 mIU/ml 的弱反應性可疑樣

  本,建議雙份重新測定,如果雙份復查濃度值均小于 10 mIU/ml,結(jié)果

  判為陰性,如果單份或雙份測定不低于 10 mIU/ml,結(jié)果判為陽性,同

  時建議動態(tài)觀察。

 10.2. 本試劑盒測定范圍為 5~1000mIU/ml,濃度值大于 1000mIU/ml 的樣本,

 其結(jié)果是通過定標曲線外延得出的計算結(jié)果。如果要獲得其更準確的結(jié)

 果,需對樣本進行稀釋后重新測定,推薦稀釋比例為 1/100,使用系統(tǒng)

 通用樣品稀釋液進行稀釋。稀釋后仍超出線性范圍的建議手工稀釋并增

 大稀釋比例。

 10.3. 由于方法學或免疫特異性等原因,使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣

 本進行檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果,因此不同試劑檢測所得結(jié)果

 不應直接相互比較,以免造成錯誤的醫(yī)學解釋,建議實驗室在檢測報

 告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中,如果改變試劑類型,則應進行

 額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進行平行比較以重新確定基線

 值。

 十一、檢驗方法的局限性

  11.1.

 本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一,臨床診斷應與臨床檢查、病

  史及其他檢測相結(jié)合。

 11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風濕因子會干擾檢測結(jié)果。此類樣本不適合

 用本試劑盒進行檢測。

 11.3.

 溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結(jié)果。

  十二、產(chǎn)品性能特征

 12.1.

 符合率:與 SFDA 批準的試劑平行檢測 1024 份臨床樣本,陰性符合率

 99.58%,陽性符合率 99.02%,總符合率 99.41%。

  12.2.

 最低檢出限:≤10mIU/ml。

 11

  12.3.

 精密性:10 孔平行檢測濃度值為 10mIU/ml 樣本,CV%≤15.0%;10 孔

 平行檢測濃度值為 100mIU/ml 樣本,CV%≤10.0%。

  12.4. 線性:在 5~1000mIU/ml 范圍內(nèi),線性相關(guān)系數(shù)(r)不低于 0.9900。

  12.5. 分析特異性:與抗-HIV(1+2)、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗體無交叉

  反應。2.5mg/ml 血紅蛋白、200mg/L 膽紅素、10g/L 甘油三酯和 500mg/dl

  膽固醇對檢測結(jié)果無顯著干擾。

  12.6. HOOK 效應:測定 HBsAb 濃度值為 30000mIU/ml 的樣本,未出現(xiàn) HOOK

  效應引起的假陰性結(jié)果。

 十三、參考文獻

 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines:chronic hepatitis B.

  Hepatology, 2004, 34: 1225-1241.

  2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and

 current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11:

 97-107.

  3.巴德年,1998 年.當代免疫學技術(shù)與應用.北京醫(yī)科大學中國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)

  合出版社.

  4.陶義訓, 1997 年第二版,免疫學與免疫學檢驗.人民衛(wèi)生出版社.

  5.中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會. 病毒性肝炎防治方案.

  主題內(nèi)容 毒 乙型肝炎病毒 e 抗原 定量測定

 一、 目的:規(guī)范 乙型肝炎病毒 e 抗原 測定的標準操作程序,確保 乙型肝炎病毒 e 抗原

  測定的結(jié)果準確有效。

 二、 適用范圍:在 AutoLumo A2000 化學發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒

 e 抗原 。

 三、臨床意義

  乙型肝炎病毒 e 抗原(HBeAg),一般通稱 e 抗原。它來源于乙型肝炎病

 毒的核心,是核心抗原的亞成分,或是核心抗原裂解后的產(chǎn)物,是可溶性蛋

 白 [1] 。當核心抗原裂解時,可溶性蛋白部分(即 e 抗原)就溶于血清中,存

 12

 在于血液循環(huán)中。有研究表明,在 PegIFNα2a 治療過程中,HBeAg 水平對乙

 肝治療應答有較好的預測價值 [2] 。許多專家關(guān)注聚乙二醇干擾素治療過程中

 HBeAg 或 HBsAg 濃度的動態(tài)變化,認為這種量的變化往往是抗原消失或血

 清轉(zhuǎn)換的前提,具有療效預測作用。對于乙肝治療過程中 HBeAg 和 HBsAg

 濃度明顯下降的患者應鼓勵繼續(xù)治療,以爭取獲得更好的療效 [3] 。

 四、 方法原理

 本產(chǎn)品采用雙抗體夾心法原理進行檢測。用抗-HBe 制備磁微粒,辣根過

 氧化物酶標記抗-HBe 制備酶結(jié)合物。通過免疫反應形成抗體-抗原-酶標抗體

 復合物,該復合物催化發(fā)光底物液發(fā)出光子,發(fā)光強度與 HBeAg 的含量成正

 比。

 五、標本的采集與處理

 5.1. 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本,推薦對于使用普通管采血的樣

 本,離心前樣本應 37℃孵育至少 1h;對于使用促凝管采血的樣本,離心

 前樣本應 37℃孵育至少 0.5h,離心條件 10000g/min,10min;對于使用

 抗凝管采血的樣本,離心條件 10000g/min,10min?鼓芡扑]使用肝

 素鈉作為抗凝劑,避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。

  5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結(jié)果,應離心除去。

  5.3. 嚴重溶血、脂血或渾濁的樣本不能用于測定。

 5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時;如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣

 本放置在 2~8℃的冰箱中;若需 48 小時以上保存或運輸,則應采用正確

 離心條件提取血清或血漿凍存于-20℃以下,避免反復凍融。使用前恢復

 到室溫,輕輕搖動混勻。

 六、標本拒收標準

 1)嚴重溶血、脂血

 2)標本標識不明

 七、儀器與材料

  7.1.儀器:

 適用于 Lucy2、Lumo、AutoLumo A2000 化學發(fā)光檢測儀。

  7.2.試劑:AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒 e 抗原 試劑

 7.2.1.試劑準備:本試劑為即用型試劑,可以直接放在儀器上。

  7.2.2.試劑盒于 2~8℃儲存,有效期 12 個月。

 13

  7.2.3.試劑盒應防止冷凍,避免強光照射。

  7.2.4.試劑盒開啟使用后,2~8℃保存可使用 1 個月。

  7.2.5.試劑盒可適應 1 周內(nèi)常溫運輸,運輸過程中應輕拿輕放,避免重壓,防止雨雪淋濕和陽光曝曬。

 7.2.6.試劑機載穩(wěn)定性

  7.2.6.1. 試劑包(磁微;鞈乙、酶結(jié)合物)豎直向上存放,

 在 2~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后,才可上機使

 用。首次使用后,機載或在 2 ~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期

 為 28 天。

  7.2.6.2. 要進行分裝,于-20℃凍存,但應避免反復凍融。

 八、檢驗方法

  8.1. 消耗品檢查:

  8.1.1. 根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。

  8.1.2. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

  8.2. 試劑包裝載:

  8.2.1. 試劑包首次上機前,輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成

  分,避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。

  8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。

  8.2.3. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼,可以手工輸入。

  8.2.4. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

  8.3. 測試:

  8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中,每次測試樣本量為 50µl。

  8.3.2.

 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入樣本信息。

  8.3.3. 選擇“運行”開始測試,系統(tǒng)自動進行試驗操作。

  8.3.4. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

 8.4. 定標:

  8.4.1.

 儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數(shù)。

  8.4.2. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡,可以手工輸入。

  8.4.3. 將校準品轉(zhuǎn)移至樣本容器,放置在儀器配套樣本架中。

  8.4.4. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入定標信息。

 14

  8.4.5. 選擇“運行”開始測試,生成定標曲線。

  8.4.6. 定標曲線有效期為 28 天。

  8.4.7. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

  8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要進行定標曲線的重新生成:

  8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復測定后仍然超出范圍;

  8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改;

  8.4.8.3. 超出定標曲線的有效期限;

  8.4.8.4. 儀器重要部件更換或維修。

 8.5. 質(zhì)控:

 8.5.1. 使用至少兩個分析物水平的質(zhì)控品進行質(zhì)控。

  8.5.2.

 出現(xiàn)以下情況需要進行質(zhì)控:

 8.5.2.1. 測試試劑盒使用超過 24 小時;

 8.5.2.2.

 更換新的試劑盒;

 8.5.2.3. 重新生成定標曲線;

 8.5.2.4. 停機。

  8.5.3.

 各實驗室需根據(jù)自身情況建立適合本實驗室的可接受范圍,以確

 保合適的測試性能。

  8.5.4. 質(zhì)控值應落在規(guī)定的范圍內(nèi),如出現(xiàn)失控,應采取糾正措施。

  8.6. 稀釋

  8.6.1. 使用手工稀釋或儀器自動稀釋功能,儀器自動稀釋的最大比例為

  1:100。

  8.6.2. 手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進行稀釋,將得到的檢測結(jié)果

  乘以稀釋倍數(shù)計算最終結(jié)果。

  8.6.3. 選擇儀器自動稀釋功能,可以得到準確的檢測結(jié)果,參考相應的

  儀器系統(tǒng)操作說明以及幫助系統(tǒng)。

 8.7.結(jié)果計算:

  選擇適當?shù)那擬合方式,本試劑盒推薦采用四參數(shù)擬合方式,以校

 準品濃度值為 x 軸,以校準品發(fā)光強度值的 log 值為 y 軸建立定標曲線。

 根據(jù)待測樣本的發(fā)光強度值回算相應的濃度值。儀器自動操作系統(tǒng)可通過

 15

 存儲的定標曲線以及樣本測試得到的信號值自動計算樣本測試結(jié)果。

 九、參考范圍

 檢測 500 例乙肝患者樣本和 500 例正常人樣本,用 ROC 曲線方法確定正

 常參考值為<0.1PEI U/ml;建議各實驗室根據(jù)自己實際條件及接觸人群建立

 正常參考值。本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一,供臨床醫(yī)生參考。

 十、檢驗結(jié)果的解釋

 10.1. 用本試劑盒檢測結(jié)果為參考值附近等可疑樣本,建議重新測定,動態(tài)觀

  察。

 10.2. 由于方法學或免疫特異性等原因,使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本

  進行檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果,因此不同試劑檢測所得結(jié)果不應

  直接相互比較,以免造成錯誤的醫(yī)學解釋,建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生

  的檢測報告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中,如果改變試劑類型,則

  應進行額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進行平行比較以重新確定

  基線值。

  10.3. 根據(jù) WHO 文獻報道 [4] ,1PEI U/ ml≈1.05IU/ml。

 十一、檢驗方法的局限性

  11.1. 本產(chǎn)品檢測結(jié)果僅供臨床參考,不應作為臨床診治的唯一依據(jù),對患

 者的臨床管理應結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查、治療反

 應及流行病學等信息綜合考慮。

 11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風濕因子會干擾檢測結(jié)果,必須結(jié)合患者病

 史,臨床檢查和其他臨床資料來綜合評估檢測結(jié)果。

 11.3. 嚴重溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結(jié)果。

  十二、產(chǎn)品性能特征

  12.1. 陰性參考品符合率:符合中國食品藥品檢定研究院陰性參考品的要求;

 12.2. 陽性參考品符合率:符合中國食品藥品檢定研究院陽性參考品的要求;

 12.3. 最低檢出量:符合中國食品藥品檢定研究院最低檢出量參考品的要求;

 12.4. 空白限:不大于 0.05PEI U/ml;

 12.5. 線性:在 0.1~200PEI U/ml 范圍內(nèi),線性相關(guān)系數(shù) r≥0.9900;

 12.6. 準確性:測定結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi);

 16

 12.7. 分析特異性:與 HIV 抗體、HCV-IgG 抗體、HAV-IgM 抗體無交叉反應。

 12.8. 精密度:變異系數(shù)不高于 15.0%;

 12.9. 干擾物質(zhì):40mg/dl 膽紅素、2.5mg/ml 血紅蛋白、500mg/dl 甘油三酯對

 檢測結(jié)果無顯著影響;

 12.10. 抗凝劑的影響:使用肝素抗凝的血漿對檢測結(jié)果無顯著影響;

 12.11. HOOK 效應:測定含量為 1600PEI U/ml 的樣本,不會出現(xiàn) HOOK 效應;

 12.12. 方法學對比:與 SFDA 批準上市的試劑盒對比檢測 1119 份臨床樣本,

  陰性符合率 100%,陽性符合率 99.23%,總體符合率為 99.73%。

  十三、參考文獻

  1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines:chronic hepatitis B.

 Hepatology, 2004, 34: 1225-1241.

 2.Moucari R, Mackiewicz V, Lada O, et al. Early serum HBsAg drop: a strong

  predictor of sustained virological response to pegylated interferon alfa-2a in

  HBeAg-negative patients.Hepatology,2009,49:1151-1157.

 3.干擾素治療慢性乙型肝炎專家討論組. 干擾素治療慢性乙型肝炎專家建議

 [J].中華傳染病雜志, 2007, 25(10): 577-583.

 4.Annette, Reissinger, Peter, et al. Collaborative Study to Establish a WorldHealth

  Organization International Standard for Hepatitis B e Antigen (HBeAg)[J].

  Expert Committee on Biological Standardization, 2013, (2228):

  1-37

  主題內(nèi)容 毒 乙型肝炎病毒 e 抗體 定量測定

 17 一、 目的:規(guī)范 乙型肝炎病毒 e 抗體 測定的標準操作程序,確保 乙型肝炎病毒 e 抗體

  測定的結(jié)果準確有效。

 二、 適用范圍:在 AutoLumo A2000 化學發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒

 e 抗體 。

 三、臨床意義

  乙型肝炎病毒(HBV)屬嗜肝 DNA 病毒科, 具有明顯的種屬及嗜肝特性

  (盡管其亦可感染肝以外的組織、器官或細胞,如脾、睪丸、人外周血單個

 核細胞等),可致持續(xù)性病毒感染。HBV 的感染導致血漿中出現(xiàn)特異性的乙

 肝病毒 e 抗體及其它一系列特異性的血清學標志物。e 抗體是乙型肝炎病毒

 e 抗體的簡稱(抗-HBe),它是由 e 抗原刺激人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生出來的特異

 性抗體,這種特異的 e 抗體能夠和 e 抗原結(jié)合。

 四、方法原理

 本產(chǎn)品采用競爭法原理進行檢測。用 e 抗體和 e 抗原包被磁微粒,用辣

 根過氧化物酶標記 e 抗體制備酶結(jié)合物。通過免疫反應形成抗體-抗原-酶標抗

 體復合物,該復合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子,發(fā)光強度與 e 抗體的含量成反

 比。

 五、標本的采集與處理

 5.1. 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本,推薦對于使用普通管采血的樣

 本,離心前樣本應 37℃孵育至少 1h;對于使用促凝管采血的樣本,離心

 前樣本應 37℃孵育至少 0.5h,離心條件 10000g/min,10min;對于使用

 抗凝管采血的樣本,離心條件 10000g/min,10min?鼓芡扑]使用肝

 素鈉作為抗凝劑,避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。

 5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結(jié)果,應離心除去,并確定樣

 本未變質(zhì)方可使用。

  5.3.

 溶血或脂血的樣本不能用于測定。

 5.4.

 樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時;如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣

  本放置在 2~8℃的冰箱中;若需 48 小時以上保存或運輸,則應凍存于

  -20℃以下,避免反復凍融。使用前恢復到室溫,輕輕搖動混勻。

 六、標本拒收標準

 18

  1)嚴重溶血、脂血

 2)標本標識不明

 七、儀器與材料

 7.1.儀器:

 適用于 AutoLumo A2000 化學發(fā)光檢測儀。

 7.2.試劑:AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒 e 抗體 試劑

 7.2.1.試劑準備:本試劑為即用型試劑,可以直接放在儀器上。

  7.2.2.試劑盒于 2~8℃儲存,有效期 12 個月。

  7.2.3.試劑盒應防止冷凍,避免強光照射。

  7.2.4.試劑盒開啟使用后,2~8℃保存可使用 1 個月。

  7.2.5.試劑盒可適應 1 周內(nèi)常溫運輸,運輸過程中應輕拿輕放,避免重壓,防止雨雪淋濕和陽光曝曬。

 7.2.6.試劑機載穩(wěn)定性

 7.2.6.1.

 試劑包(磁微;鞈乙、酶結(jié)合物)豎直向上存放,

 在 2 ~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后,才可上機使

 用。首次使用后,機載或在 2 ~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期

 為 28 天。

  7.2.6.2. 陰陽性對照開瓶后保存于2~8°C,穩(wěn)定期可維持1個

  月;若需使用更長時間,應根據(jù)需要進行分裝,于

  -20℃凍存(可以保存2個月),但應避免反復凍融。

 7.2.6.3. 試劑在 2 ~8°C 保存可穩(wěn)定至標簽上所標示的有效

  期。

  7.3.質(zhì)控液:推薦使用安圖配套質(zhì)控品或第三方質(zhì)控品 BioRAD QC 八、檢驗方法

  8.1. 消耗品檢查:

  8.1.1. 根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。

  8.1.2. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

  8.2. 試劑包裝載:

  8.2.1. 試劑包首次上機前,輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成

  份,避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。

  8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。

 19

  8.2.3.

 如果特殊情況下儀器無法識別條碼,可以手工輸入。

  8.2.4. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

  8.3. 測試:

  8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中,每次測試樣本量為 50µl。

  8.3.2. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入樣本信息。

  8.3.3. 選擇“運行”開始測試,系統(tǒng)自動進行試驗操作。

  8.3.4. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

  8.4. 定 Cutoff 值

  8.4.1. 儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數(shù)。

  8.4.2. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡,可以手工輸入。

  8.4.3. 將陰陽性對照轉(zhuǎn)移至樣本容器,放置在儀器配套樣本架中。

  8.4.4. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入 Cutoff 值信息。

  8.4.5.

 選擇“運行”開始測試,生成 Cutoff 值。

  8.4.6. Cutoff 值有效期為 28 天。

  8.4.7. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

  8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要重新生成 Cutoff 值:

  8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復測定后仍然超出范圍;

  8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改;

  8.4.8.3.超出 Cutoff 值有效期限;

  8.4.8.4.

 儀器重要部件更換或維修。

 8.5. 質(zhì)控:

  8.5.1. 使用至少兩個分析物水平的質(zhì)控品進行質(zhì)控。

  8.5.2.

 出現(xiàn)以下情況需要進行質(zhì)控:

 8.5.2.1. 測試試劑盒使用超過 24 小時;

 8.5.2.2. 更換新的試劑盒;

 8.5.2.3. 重新生成 Cutoff 值;

 8.5.2.4 停機。

 8.5.3. 各實驗室需根據(jù)自身情況建立適合本實驗室的可接受范圍,以確

  保合適的測試性能。

 20

  8.5.4. 質(zhì)控值應落在規(guī)定的范圍內(nèi),如出現(xiàn)失控,應采取糾正措施。

 8.6.結(jié)果計算:

  Cutoff 值=陰性對照平均發(fā)光值*0.4

 有效性判斷:

 8.6.1.

 陰性對照孔平均發(fā)光值/陽性對照孔平均發(fā)光值大于 3;

 8.6.2. 陰性對照各孔相對發(fā)光強度 CV%不超過 10%(如 CV%超過

 10%,則刪除不平行點直到 CV%小于 10%或重新實驗)。

 九、參考范圍

  S/CO=待測樣本發(fā)光值/ Cutoff 值;

  當 S/CO>1.00 時,結(jié)果判為陰性;S/CO≤1.00 時,結(jié)果判為陽性。

 十、 檢驗結(jié)果的解釋

  10.1. 用本試劑盒檢測結(jié)果 COI 為 0.80~1.20 的弱反應性可疑樣本,建議復

 孔重新測定,如果雙孔復查 COI 均大于 1.00,結(jié)果判為陰性,如果單

 孔或復孔測定不大于 1.00,結(jié)果判為陽性,同時建議動態(tài)觀察。

 10.2. 由于方法學或免疫特異性等原因,使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本

 進行檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果,因此不同試劑檢測所得結(jié)果不應

 直接相互比較,以免造成錯誤的醫(yī)學解釋,建議實驗室在檢測報告中注

 明所用試劑特征。系列監(jiān)測中,如果改變試劑類型,則應進行額外的連

 續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進行平行比較以重新確定基線值。

 十一、檢驗方法的局限性

  11.1. 本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一,臨床診斷應與臨床檢查、病史

  及其他檢測相結(jié)合。

 11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風濕因子會干擾檢測結(jié)果。此類樣本不適

 合用本試劑盒進行檢測。

  11.3. 溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結(jié)果。

  十二、產(chǎn)品性能特征

 12.1.

 符合率:與 SFDA 批準的試劑平行檢測 1024 份臨床樣本,陰性符合率

 98.98%,陽性符合率 98.8%,總符合率 98.93%。

  12.2.

 最低檢出限:檢定系列國家最低檢出限參考品或經(jīng)國家參考品標化的企

 21

 業(yè)最低檢出限參考品,結(jié)果符合相應參考品的要求。

  12.3.

 精密性:10 孔平行檢測 0.5 PEI U/ml 樣本,CV%≤10.0%;10 孔平行

 檢測 5 PEI U/ml 樣本,CV%≤20.0%。

  12.4. 分析特異性:與抗-HIV(1+2)、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗體無交

 叉反應。1.25mg/ml 血紅蛋白、200mg/L 膽紅素、20g/L 甘油三酯和

 500mg/dl 膽固醇對檢測結(jié)果無干擾。

  十三、參考文獻

  1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines:chronic hepatitis B.

 Hepatology, 2004, 34: 1225-1241.

 2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11:

 97-107.

 3.巴德年,1998 年.當代免疫學技術(shù)與應用.北京醫(yī)科大學中國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)

 合出版社.

 4.陶義訓, 1997 年第二版,免疫學與免疫學檢驗.人民衛(wèi)生出版社.

 5.中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會. 病毒性肝炎防治方案.

  中華傳染病雜志, 2001, 19:56-62.

 22

 主題內(nèi)容 乙型肝炎病毒核心 抗體 定量測定

 一、 目的:規(guī)范 乙型肝炎病毒核心抗體 測定的標準操作程序,確保 乙型肝炎病毒核心

 抗體 測定的結(jié)果準確有效。

 二、 適用范圍:在 AutoLumo A2000 化學發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒

 核心抗體 。

 三、臨床意義

  核心抗體是乙型肝炎病毒核心抗體的簡稱,可簡寫為抗-HBc。核心抗原

  雖然在血清中查不出來(它在血中很快被裂解),但是它具有抗原性,能刺激

  身體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生出特性抗體,即核心抗體,故檢測抗-HBc 可以了解人體

  是否有過核心抗原的刺激,也就是說是否有過乙肝病毒的感染。所以抗-HBc

  是一項病毒感染的標志。

 四、方法原理

 本產(chǎn)品采用競爭法原理進行檢測。用核心抗原包被磁微粒,用辣根過氧

 化物酶標記核心抗體制備酶結(jié)合物。通過免疫反應形成抗原-酶標抗體復合

 物,該復合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子,發(fā)光強度與核心抗體的含量成反比。

 五、標本的采集與處理

 5.1. 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本,推薦對于使用普通管采血的樣

 本,離心前樣本應 37℃孵育至少 1h;對于使用促凝管采血的樣本,離心

 前樣本應 37℃孵育至少 0.5h,離心條件 10000g/min,10min;對于使用

 抗凝管采血的樣本,離心條件 10000g/min,10min。抗凝管推薦使用肝

 素鈉作為抗凝劑,避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。

 23 5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結(jié)果,應離心除去,并確定樣

 本未變質(zhì)方可使用。

  5.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測定。

 5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時;如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣

 本放置在 2~8℃的冰箱中;若需 48 小時以上保存或運輸,則應凍存于

 -20℃以下,避免反復凍融。使用前恢復到室溫,輕輕搖動混勻。

 六、標本拒收標準

 1)嚴重溶血、脂血

 2)標本標識不明

 七、儀器與材料

  7.1.儀器:

 適用于 AutoLumo A2000 化學發(fā)光檢測儀。

  7.2.試劑:AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒核心抗體 試劑

 7.2.1.試劑準備:本試劑為即用型試劑,可以直接放在儀器上。

  7.2.2.試劑盒于 2~8℃儲存,有效期 12 個月。

  7.2.3.試劑盒應防止冷凍,避免強光照射。

  7.2.4.試劑盒開啟使用后,2~8℃保存可使用 1 個月。

  7.2.5.試劑盒可適應 1 周內(nèi)常溫運輸,運輸過程中應輕拿輕放,避免重壓,防止雨雪淋濕和陽光曝曬。

 7.2.6.試劑機載穩(wěn)定性

  7.2.6.1. 試劑包(磁微粒混懸液、酶結(jié)合物)豎直向上存放,

 在 2~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后,才可上機使

 用。首次使用后,機載或在 2~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期

 為 28 天。

  7.2.6.2. 陰陽性對照開瓶后保存于2~8°C,穩(wěn)定期可維持1

  個月;若需使用更長時間,應根據(jù)需要進行分裝,

  于-20℃凍存(可以保存2個月),但應避免反復凍

  融。

  7.3.質(zhì)控液:推薦使用安圖配套質(zhì)控品或第三方質(zhì)控品 BioRAD QC 八、檢驗方法

  8.1. 消耗品檢查:

 24

  8.1.1. 根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。

  8.1.2. 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

  8.2. 試劑包裝載:

  8.2.1. 試劑包首次上機前,輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成

  份,避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。

  8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。

  8.2.3. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼,可以手工輸入。

  8.2.4.

 參考相應的儀器系統(tǒng)操作說明。

  8.3. 測試:

  8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中,每次測試樣本量為 50µl。

  8.3.2. 裝載樣本架,在儀器軟件界面中輸入樣本信息。

  8.3.3. 選擇“運行”開始測試,系統(tǒng)自動進行...

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