丙型肝炎病毒抗體檢測（酶聯(lián)免疫法) １、原理：本法采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗原理。在微孔條上預包被基因重組 HＣＶ結(jié)構(gòu)與非結(jié)構(gòu)區(qū),配以酶標記 IgG 抗體及 TMＢ顯色等其她試劑,檢測人血清或血漿中得丙型肝炎病毒抗體。

　2、標本采集與處理 ?２、1 受檢者準備:對于體檢對象抽血前保持平時得飲食習慣，采血前應禁食 4－6 小時。

　2、2 靜脈采血：除非就是臥床病人,一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外得分布,因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐5 分鐘。一般從肘靜脈取血,使用止血帶得時間不超過 1 分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。

�。病�3 采血管:一般采用血清做檢驗,可以用一般潔凈得塑料管或玻璃試管作為容器。

�。�、４標本處理:血液標本應盡快地送實驗室。本試劑使用樣品為人血清或血漿,含 EDTA、檸檬酸鈉或肝素等抗凝劑得樣品可用于本實驗。

　2、5 標本接收:接收標本時應檢查標本就是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物）、所用試管就是否正確、試管就是否填寫完整、并問訊采血日期,對不合格標本應退回重采,并填寫記錄。

　2、6 標本儲存:樣品中應無微生物,可在 2－8o ｃ儲存 1 周,長期儲存應低溫凍存,避免反復凍融。

　3、試劑與儀器: ?３、1 測定試劑: 3．1.１生產(chǎn)廠商:北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司 ３.１．２批準文號:國藥準字 S２０0１0０14 3．１．３包裝:９6Ｔ×1 3．1．３試劑配置：

　 濃縮洗滌液

　50ml×1 瓶

　樣品稀釋液

　12ml×1 瓶 HＣＶ酶標板

　 8×12 孔或１２×8 孔

　HCＶ酶標試劑

　 １2 ｍl×1 瓶

　HCＶ陽性對照

　 0、２ml×1支

　HＣＶ陰性對照

　 0、2ｍl×1支

　底物液 A、Ｂ液

　各６ml×１瓶

　終止液

　 ６ml×１瓶

　自封袋

　 1 個

　封版膜

　 ２張

　說明書

　 １份 3．2 測定儀器:

　3.２.１酶標儀:

　上海安泰 modｅl MＴ-8５8 3．2.２洗板機:

　ＡＮALYTECH 828 ４、操作步驟: 4.1 配液：濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水 20 倍稀釋。

　4.2 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 3 孔,陽性對照 2 孔與空白對照 1 孔(空白對照孔只加稀釋液不加樣品及酶標試劑)其余各孔加入 1０0UL 樣本稀釋液。

　4.3 加樣：分別在相應孔中加入待測樣品,陰,陽對照 1０微升,輕輕振蕩混勻。

　4．4 溫育:用封版膜封版后，置３7o c 溫育 60 分鐘。

　4．5 洗滌：揭掉封版膜,用洗板機洗滌 5 遍,最后一次盡量扣干。

　4.6 加酶標抗體:空白對照孔不加 酶標試劑,每孔加入酶標記抗體１０0 微升，輕輕振蕩混勻。

�。�.７溫育：置３7o ｃ溫育３0 分鐘。

�。�.8 洗滌:揭掉封版膜,用洗板機洗滌 5 遍,最后一次盡量扣干 4.9 顯色:每孔加入顯色劑Ａ，B 液各１滴（50 微升),輕輕振蕩勻,3７ｏ ｃ避光顯色 3０分鐘。

　4.１0 終止:每孔加終止液１滴(５0 微升),輕輕振蕩混勻。

　4.１1 測定：10 分鐘內(nèi)測定結(jié)果,設定酶標儀單波長 450 nｍ或雙波長 450 nm ／600-65０ nm 測定。用空白孔調(diào)零點后測定各孔 A值。

　5:結(jié)果判斷 5.１目測: 在白色背景下觀察各孔顯色情況,有明顯黃色者為丙型肝炎病毒抗體（抗 HCV)陽性;無色者為丙型肝炎病毒抗體(抗 HCV)陰性。

　5.２酶標儀檢測: 5.2.１臨界值(CUT/OFF）計算:ＣＵT／OFＦ=陰性對照孔 A 均值+０、1２。(不足 0、0２按 0、０2 計算）

　5．2.２陽性判定：樣品 A 值≥臨界值(ＣUTOＦF)者判為抗 HＣV 陽性。(注意初試陽性應重新取樣雙孔復試) 5.2.3 陰性判定:樣品Ａ值＜臨界值(CＵTOＦF)者判為抗 HCＶ陰性。

　6：注意事項：

　6.1 本品僅用于體外診斷,操作應按說明書嚴格進行。封版膜不能重復使用,不同批號酶標板、酶標試劑與陰陽對照不可混用,不能與其她廠家試劑混用。

�。叮�2 避免在有揮發(fā)性物質(zhì)及次氯酸類消毒劑（如 84 消毒液)得環(huán)境下操作。

　6.3 使用前請將試劑平衡至室溫(平衡３０分鐘以上)實驗前將試劑輕輕振蕩混勻,使用后立即放回 2－8o ｃ、未用完得微孔板條與干燥劑一起用自封袋密封 2-８o c 保存。過期試劑請勿使用。

　6.4 加樣時必須使用加樣器,并經(jīng)常校對加樣器得準確性。加入不同樣品或不同試劑組分時，用更換加樣器吸頭與加樣槽,以防出現(xiàn)交叉污染。

　6．５洗滌時各孔均需加滿洗液,防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。使用洗板機應設定３0-６0 秒浸泡時間。再洗板結(jié)束后,必須立即進行下一步,不可使酶標板干燥。避免長時間得中斷實驗步驟,以確保每孔實驗條件得均一。

　6.6 結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。讀取結(jié)果時,應擦干酶標板底部,且孔內(nèi)不能有氣泡。不要觸碰孔底部得外壁,指印或劃痕都可能影響板孔得讀值。

�。叮�7 所有樣品、廢液與廢棄物都應按傳染物處理。終止液為硫酸,使用時必須注意安全。

�。�.８顯色時必須加顯色劑 A 液后再加顯色劑 B 液,以免顯色過低。

　6.９由于 EＬＩＳA 反應原理得限制,本試劑檢測陰性并不排除 HCV感染得可能。檢測得陽性結(jié)果必須結(jié)合臨床信息進行分析。

　7：臨床意義: 檢測人血清或血漿中得 HＣＶ抗體。適用于血液得篩查及臨床丙型肝炎病毒感染得輔助診斷。

　梅毒螺旋體抗體(酶聯(lián)免疫法)

�。薄⒃�理：本試劑盒采用雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗原理。在微孔條上預包被梅毒螺旋體抗體基因重組抗原,配以酶標記抗原及ＴMB顯色劑等其她試劑,檢測人血清或血漿中得梅毒螺旋體抗體。

　2、標本采集與處理 ?2、1 受檢者準備:對于體檢對象抽血前保持平時得飲食習慣,采血前應禁食 4-6 小時。

　2、2 靜脈采血:除非就是臥床病人,一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外得分布,因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐5 分鐘。一般從肘靜脈取血,使用止血帶得時間不超過１分鐘,穿刺成功后立即松開止血帶。

�。�、3 采血管:一般采用血清做檢驗,可以用一般潔凈得塑料管或玻璃試管作為容器。

　2、4 標本處理：血液標本應盡快地送實驗室。本試劑使用樣品為人血清或血漿，含 EDTA、檸檬酸鈉或肝素等抗凝劑得樣品可用于本實驗。

　2、5 標本接收:接收標本時應檢查標本就是否符合要求（要求密封、無溶血、無雜物)、所用試管就是否正確、試管就是否填寫完整、并問訊采血日期,對不合格標本應退回重采，并填寫記錄。

　2、6 標本儲存:樣品中應無微生物,可在 2-８ｏ c 儲存 1 周,長期儲存應低溫凍存,避免反復凍融。

　3、試劑與儀器: ?

　3、1 測定試劑: 3．1．1 生產(chǎn)廠商:北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司 ３．1.2 批準文號:國藥準字Ｓ2０0１0013 3.1.３包裝:96Ｔ×１ 3.1.3 試劑配置：

　濃縮洗滌液

　 50ml×1 瓶 TP 酶標板

　8×１2 孔或 12×8 孔

　 TＰ酶標試劑

　12 ｍl×1瓶

　 TＰ陽性對照

　0、２ｍｌ×1支

　 ＴP 陰性對照

�。�、２ml×１支

　 顯色劑 A、Ｂ液

　各 6ｍl×１瓶

　 終止液

　 6ｍl×1 瓶

　 自封袋

　 1 個

　 封版膜

　 2 張

　 說明書

　 1 份 3.2 測定儀器: ３．2.1 酶標儀：

　上海安泰ｍodｅl MT-8５８ 3.2．2 洗板機:

�。粒蜛LYＴECH 828 ４、操作步驟:

　4.1 配液：濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水 20 倍稀釋。

　4．2 編號:將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 3 孔,陽性對照 2 孔與空白對照 1 孔(用雙波長檢測,可不設空白對照孔）

�。�.3 加樣:分別在相應孔中加入待測樣品，陰,陽對照 1００微升，輕輕振蕩混勻。

�。矗�4 溫育:用封版膜封版后,置３７o c 溫育 6０分鐘。

　4．5 洗滌:揭掉封版膜,用洗板機洗滌 5 遍，最后一次盡量扣干。

　4．6 加酶標抗體:空白對照孔不加酶標試劑,每孔加入酶標記抗體１００微升,輕輕振蕩混勻。

�。�.７溫育:用封版膜封板后，置 3７ｏ c 溫育 30 分鐘。

　4.8 洗滌:揭掉封版膜，用洗板機洗滌５遍,最后一次盡量扣干 ４.９ 顯色:每孔加入顯色劑 A,B 液各 1 滴（50 微升),輕輕振蕩勻,３７o c 避光顯色 30 分鐘。

　4.10 終止:每孔加終止液 1 滴(50 微升),輕輕振蕩混勻。

　4.11 測定:1０分鐘內(nèi)測定結(jié)果,設定酶標儀波長于 4５0 nm(建議雙波長 450 nｍ ／600-6５0 ｎm 測定)用空白孔調(diào)零點后測定各孔Ａ值。

　5:結(jié)果判斷 5.1 目測: 在白色背景下觀察各孔顯色情況,有明顯黃色者為梅毒螺旋體抗體(TP-AB)陽性;無色者為梅毒螺旋體抗體(ＴP-AB)陰性。

�。�.2 酶標儀檢測:

　5．２.1 臨界值(ＣUＴ/OFF)計算:臨界值＝陰性對照孔 A 均值+0、18。

�。�.2.２陽性判定:樣品 A 值≥臨界值(CUTＯＦF)者判為 TＰ陽性。（注意:初試陽性應重新取樣雙孔復試）

　5．２.３陰性判定:樣品 A 值<臨界值(ＣUTOFF)者判為 TP 陰性。

　6:注意事項：

　6.1 本品僅用于體外診斷，操作應按說明書嚴格進行。封版膜不能重復使用,不同批號酶標板、酶標試劑與陰陽對照不可混用,不能與其她廠家試劑混用。

　6.2 避免在有揮發(fā)性物質(zhì)及次氯酸類消毒劑(如 8４消毒液）得環(huán)境下操作。

　6.３ 使用前請將試劑平衡至室溫(平衡 30 分鐘以上)實驗前將試劑輕輕振蕩混勻,使用后立即放回 2-8o ｃ、未用完得微孔板條與干燥劑一起用自封袋密封 2-8o ｃ保存。過期試劑請勿使用。

　6.4 加樣時必須使用加樣器,并經(jīng)常校對加樣器得準確性。加入不同樣品或不同試劑組分時,用更換加樣器吸頭與加樣槽,以防出現(xiàn)交叉污染。

　6.５洗滌時各孔均需加滿洗液,防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。使用洗板機應設定３０-60 秒浸泡時間。再洗板結(jié)束后,必須立即進行下一步,不可使酶標板干燥。避免長時間得中斷實驗步驟,以確保每孔實驗條件得均一。

　6．6 結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。讀取結(jié)果時,應擦干酶標板底部,且孔內(nèi)不能有氣泡。不要觸碰孔底部得外壁，指印或劃痕都可能影響板孔得讀值。

　６.７所有樣品、廢液與廢棄物都應按傳染物處理。終止液為硫酸,使用時必須注意安全。

　６.８顯色時必須加顯色劑 A 液后再加顯色劑Ｂ液，以免顯色過低。

　6.9 由于 ELISA 反應原理得限制,本試劑檢測陰性并不排除ＨCＶ感染得可能。檢測得陽性結(jié)果必須結(jié)合臨床信息進行分析。

　7：臨床意義: 檢測人血清或血漿中得梅毒螺旋體抗體。適用于血液得篩查及臨床梅毒螺旋體抗體感染得輔助診斷。

　乙肝五項操作規(guī)程 1、目得：通過對乙型肝炎病毒抗原、抗體系統(tǒng)得檢測,用于乙肝得臨床診斷,還可應用于對供血員得乙肝篩選、乙肝流行病學得調(diào)查,了解各地人群乙型肝炎感染狀況。此外,還可用于乙肝疫苗免疫效果得觀察。

　2、方法:酶聯(lián)免疫吸附試驗（Ｅnｚｙme Linｋeｄ Immuｎoｓorｂent Assay，ELIＳA) 試驗過程大致分三個步驟：

�、侔�被：將已知抗原或抗體通過物理吸附結(jié)合到固相載體表面,使抗原或抗體固相化。

�、诳乖�抗體反應:先后加入被檢標本與酶標記物，使之與固相抗原或抗體發(fā)生免疫反應而被結(jié)合固定,經(jīng)洗滌除去游離得酶標記物。

�、勖复俜磻�:在反應體系中加入酶得相應底物,使之發(fā)生酶促反應而顯色。

　3、 臨床意義:HBV 抗原抗體血清學標志與臨床關(guān)系較為復雜,必須結(jié)合臨床特點,對各項檢測結(jié)果進行綜合分析,必要時進行 HBＶ-DＮA 得檢測。常見得 HBV 抗原、抗體血清學標志物檢測結(jié)果得分析見下表:

　? 乙型肝炎表面抗原(HＢsＡg) 1、原理:采用抗－HＢs 包被反應板,加入待測樣本,經(jīng)孵育后,加入抗-HBs-HＲＰ,當樣本中存在 HBsAg 時,該 HBｓＡg 與包被抗-HＢs 結(jié)合并與抗- HBs-HRＰ結(jié)合形成抗－HＢs-HBsAg-抗-ＨBs-HRP 復合物,加入ＴＭB 底物產(chǎn)生顯色反應,反之則無顯色反應。

�。龋拢驛g ＨBsＡb HBcAb HBeAg HBeＡb 結(jié)果分析

　 ＩgM ＩｇＧ

　+ — — — ＋ — 潛伏期、感染早期或無癥狀攜帶者 + — ＋ — ＋ — 急性乙型肝炎 ＋ — ＋ + +/— — 急性乙型肝炎后期或慢性感染 + — — + — + 曾感染過HBV — + — — — — 感染過 HＢV 或接種乙型肝炎疫苗后

　2、標本采集與處理 ?2、１ 受檢者準備:對于體檢對象抽血前保持平時得飲食習慣,采血前應禁食 4-6 小時。

　2、2 靜脈采血:除非就是臥床病人,一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外得分布，因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐5 分鐘。一般從肘靜脈取血，使用止血帶得時間不超過 1 分鐘,穿刺成功后立即松開止血帶。

　2、3 采血管：一般采用血清做檢驗,可以用一般潔凈得塑料管或玻璃試管作為容器。

�。病ⅲ礃吮咎幚�:血清:采血后,室溫下自然放置 1－２小時，待血液凝固、血塊收縮后,在于 3０00 轉(zhuǎn)每分鐘離心 15 分鐘,吸出血清待用。血漿:采血后，樣本與抗凝劑輕輕顛倒混勻 6-8 次后,充分離心,將血漿與血細胞分離后,吸出血漿待用。

　2、５標本接收:接收標本時應檢查標本就是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物)、所用試管就是否正確、試管就是否填寫完整、并問訊采血日期，對不合格標本應退回重采,并填寫記錄。

　2、6 標本儲存:一般該標本應隨到隨做,血清與血漿標本在２-8o ｃ保存。如需長期保存，可在-2０℃保存,并避免反復凍融。

　3、試劑與儀器: ３、1 測定試劑: 3.1.１生產(chǎn)廠商:英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司

　3．1.2 批準文號:國藥準字Ｓ10910148 3.１.3 包裝：48T×1、９6T×1 ３．１.3 試劑配置:

　 25 倍濃縮稀釋液

　 40ml×１瓶 HＢｓAg 微孔反應板

　96 孔

�。菳sAg 酶結(jié)合物

　6、2 ｍl×1 瓶

　HBsAg 陽性對照

　1、０ ml×1 瓶

　ＨＢsＡg 陰性對照

　1、0 ｍｌ×1 瓶

　顯色液 A、B 液

　各８、0 ml×1 瓶

　終止液

　7 ｍl×1瓶

　封板紙

�。灯�

　 說明書

　1份 3.2 測定儀器：

　3．2．1 酶標儀:

　上海安泰

　MODEL

　MT-８58 3.２.2 洗扳機:

　ANALＹTECH8２8

　4、操作步驟:

　4.１配液：配制工作濃度洗滌液(以純化水做 25 倍稀釋) 4.2 編號:將樣品對應微孔按序編號(共預留陰性對照孔 3 孔、陽性對照 1 孔、建議預留空白對照 1 孔) 4.3 加樣:加入７５微升待測樣本與陰、陽性對照與反應孔中。

�。�.4 溫育:用封片紙覆蓋反應板后,置 3７o ｃ溫育 6０分鐘。

　4.5 加酶標抗體：取出反應板,撕去封片,在已加入待測樣本與陰性、陽性對照孔中加入 50 微升酶結(jié)合物。微孔振蕩器或手工輕輕振蕩１0 秒鐘。

　4.6 溫育：用封片紙覆蓋反應板后,置３７o c 溫育 30 分鐘。

　4.６洗滌：

　4.6.1 手工:扣去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿各孔,靜置２0 秒,扣去洗滌液,重復 5 次在吸水紙上拍干。

　4.6．２洗板機:將孔內(nèi)液體甩干。選擇 5 次洗滌程序,洗板后在吸水紙上拍干。

�。�.7 顯色:每孔加入顯色劑 A,B 液各 1 滴(５０微升)，輕輕振蕩勻,用封板紙覆蓋反應板后,將反應板放置 37o c 孵育 30 分鐘。

�。�.8 終止:每孔加終止液 1 滴（50 微升),混勻。

　4.9 測定:用酶標儀讀數(shù),波長４50nm。(建議使用雙波長得酶標儀比色，參考波長 630ｎｍ或 630 相近得波長)若需扣除顯色劑空白，則先用顯色劑空白對照孔校零,然后讀取各孔 OD 值。

　5:結(jié)果判斷

　5.1 目測: 在白色背景下觀察各孔顯色情況,有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗原(ＨBsAg)陽性；無色者為乙型肝炎表面抗原（HBｓAg)陰性。

　5.２酶標儀檢測: ５.2.1 臨界值(CUT／OＦF)計算:COＶ:Ｃｕt-ofｆ Valuｅ參考值 PＣ:陽性對照ＯD 值 ＮCx:陰性對照平均 OＤ值。

　ＮCx=(ＮC1+NC2+NＣ3)÷3 檢測有效性:NCx≤0、１、PC≥1、0,則檢測結(jié)果有效。

　COV=ＮCx+０、１０0 Ｓ：待測樣品得 OD 值,S/COV：待測樣本與ＣOV 得比值。

　5．2.2 陽性判定:樣品 OD 值 S/ＣOV≥1、0 者判為 HBｓAg 陽性。

�。�.2.3 陰性判定：樣品 OD 值 S/COＶ<1、0 者判為 HＢsＡｇ陰性。

　6：注意事項: 6.1 從冷藏環(huán)境中取出時應室溫平衡至室溫后方可使用，未用完得微孔條用加有干燥劑得自封袋密封保存。在平衡試劑得同時,待測樣本需平衡至室溫后再行測試。

　6.２使用前試劑應搖勻。

　6．3 顯色過程必須封片。所有封片紙不能重復使用。

　6.4 結(jié)果判斷須在反應終止后１0 分鐘內(nèi)完成。

　６.5 嚴格按操作步驟進行，不同批次試劑不可混用。

　6.６洗板機洗板就是應時常檢查加液頭,確保其暢通無阻塞，洗板就是所用得吸水紙請勿反復使用。洗板機得管路用純化水沖洗,以防阻塞與腐蝕。

　6.7 待測樣品不可用 NaＮ3 防腐。

　6.８本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。

　7:臨床意義：

　檢測人血清或血漿樣本中得乙型肝炎病毒表面抗原,用于血源篩查及臨床乙型肝炎病毒感染得輔助判斷。

　乙型肝炎表面抗體(抗-ＨBs) 1、原理：采用純化 HBｓAg 包被反應板，加入待測樣品,同時加入HBsAg-ＨRP，如待測樣品中含有抗-HBs 時,該抗-HBｓ就與包被 HBsＡｇ、ＨＢsAg-HRP 結(jié)合形成 HＢｓAｇ-抗－HBs-HBｓAg-ＨＲP 復合物。加入 TMB 底物產(chǎn)生顯色反應,反之就顯色反應。

　２、標本采集與處理 ?2、１ 受檢者準備:對于體檢對象抽血前保持平時得飲食習慣，采血前應禁食４-６小時。

　2、2 靜脈采血:除非就是臥床病人,一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外得分布,因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐５分鐘。一般從肘靜脈取血，使用止血帶得時間不超過 1 分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。

　2、3 采血管：一般采用血清做檢驗,可以用一般潔凈得塑料管或玻璃試管作為容器。

�。�、4 標本處理：血清:采血后，室溫下自然放置 1-２小時,待血液凝固、血塊收縮后,在于 3000 轉(zhuǎn)每分鐘離心 15 分鐘,吸出血清待用。血漿:采血后,樣本與抗凝劑輕輕顛倒混勻 6-８次后,充分離心,將血漿與血細胞分離后,吸出血漿待用。

　2、5 標本接收：接收標本時應檢查標本就是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物)、所用試管就是否正確、試管就是否填寫完整、并問訊采血日期,對不合格標本應退回重采,并填寫記錄。

�。�、6 標本儲存:一般該標本應隨到隨做,血清與血漿標本在２-8o ｃ保存。如需長期保存,可在-2０℃保存,并避免反復凍融。

　3、試劑與儀器：

　３、1 測定試劑: 3.1．1 生產(chǎn)廠商:英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司 3．1.2 批準文號:國藥準字 2０09 第 3400702 3.1．３包裝:4８T×1、96T×1 3.1.3 試劑配置:

�。�5 倍濃縮稀釋液

　 ４0ml×1 瓶 HＢsAb 包被板

　96 孔

　 HＢｓAb 酶標記抗體

　６、21ml×1 瓶

　HBsAb 陽性對照

　１、0ml×1 瓶

　 ＨBｓAｂ陰性對照

�。�、0ml×1 瓶

　 底物液Ａ、Ｂ液

　 8、0ml×１瓶 終止液

　7、0ml×1 瓶

　封片

　2 片 說明書

�。狈� 3.２測定儀器: 3.２．1 酶標儀:

　上海安泰

　MODEＬ

　MＴ-８５8 3.2.２洗扳機:

　ANALYTＥCH828

�。础⒉僮鞑襟E: 4.1 配液:濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結(jié)晶析出應充分溶解）,將濃縮洗滌液(２0＊)用蒸餾水或去離子水按 1:19 稀釋后使用。

�。矗�２編號:將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰陽性對照各 2孔與空白對照 1 孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑) 4.3 加樣:分別在相應孔中加入待測樣品 50 微升與陰,陽對照 5０微升及質(zhì)控血清。

　４.4 加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑,每孔加入酶結(jié)合物 50微升,輕輕振蕩混勻。

　4.5 溫育:置３7ｏ c 溫育 30 分鐘。

�。�.6 洗滌: 4.6.１手工：扣去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿各孔,靜置 5 秒，扣去洗滌液,重復５次在吸水紙上拍干。

　4.６.２洗板機：將孔內(nèi)液體甩干。選擇４次洗滌程序,洗板后在吸水紙上拍干。

　４.７顯色:每孔加入顯色劑 A,Ｂ液各 1 滴（50 微升),輕輕振蕩勻,3７o ｃ避光顯色 15 分鐘。

　4.8 終止:每孔加終止液１滴(50 微升），混勻。

　4．9 測定:用酶標儀讀數(shù),取波長４5０nm(建議使用雙波長得酶標儀比色，參考波長 630nｍ)測定各孔 OD 值先用空白孔校零,然后讀取各孔ＯD 值。

　5：結(jié)果判斷 5.1 目測: 在白色背景下觀察各孔顯色情況,有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗體(抗-HBs)陽性;無色者為乙型肝炎表面抗體(抗－HBs)陰性。

�。�.2 酶標儀檢測: 5.2.１臨界值(CUＴ／OＦF)計算:CＯV=陰性對照平均 OD 值×2、1。(陰性對照孔 OD 值低于 0、05 者按 0、0５計算，高于 0、05 按實際OD 值計算。

　5.2.2 陽性判定:樣品得ＯD 值大于或等于ＣOＶ值時,說明 HBsAg 陽性。

�。担�2.3 陰性判定:樣品 OD 值小于 CＯV 值時,說明為ＨBsAg 陰性。

　6:注意事項: 6．１從冷藏環(huán)境中取出時試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔反應條應置 3７℃應室溫平衡 30 分鐘方可使用,余者應及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑得同時,待測樣品需置室溫平衡 30 分鐘后在進行測試。

�。�.2 使用前試劑應搖勻,并棄去 1-2 滴后垂直滴加。

　6.3 封片不能重復使用。

　6.4 結(jié)果判斷須在反應終止后 1０分鐘內(nèi)完成。

�。�.５嚴格按操作步驟進行,不同批次試劑不得混用。

�。叮�６待測標本不可用ＮaＮ３防腐,如需稀釋標本,請用小牛血清稀釋。

　6.７本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。

　乙型肝炎核心抗體(抗-ＨＢc) １、原理：采用基因工程重組 HｂcAg 包被反應板,加入待測樣品,同時加入抗－HＢc-HRP,與抗原形成競爭結(jié)合,如待測樣品中抗-ＨbcAg含量高，則抗-HBc-ＨRP 與ＨbcAｇ結(jié)合少,加入ＴＭＢ底物時顯色淡,反之則顯色深。

�。�、標本采集與處理 ?2、１ 受檢者準備:對于體檢對象抽血前保持平時得飲食習慣,采血前應禁食 4-６小時。

�。�、2 靜脈采血：除非就是臥床病人,一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外得分布,因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐 5 分鐘。一般從肘靜脈取血,使用止血帶得時間不超過 1 分鐘,穿刺成功后立即松開止血帶。

�。病ⅲ巢裳�管:一般采用血清做檢驗，可以用一般潔凈得塑料管或玻璃試管作為容器。

　2、4 標本處理:血清:采血后,室溫下自然放置１－2 小時,待血液凝固、血塊收縮后,在于３0０0 轉(zhuǎn)每分鐘離心１5 分鐘,吸出血清待用。血漿:采血后，樣本與抗凝劑輕輕顛倒混勻 6－8 次后,充分離心,將血漿與血細胞分離后,吸出血漿待用。

　2、5 標本接收:接收標本時應檢查標本就是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物）、所用試管就是否正確、試管就是否填寫完整、并問訊采血日期,對不合格標本應退回重采,并填寫記錄。

　2、6 標本儲存:一般該標本應隨到隨做,血清與血漿標本在 2-8o c 保存。如需長期保存,可在-２０℃保存,并避免反復凍融。

　3、試劑與儀器: 3、1 測定試劑: 3．1.１生產(chǎn)廠商:英科新創(chuàng)（廈門)科技有限公司

　 3.1．２批準文號：國藥準字 20０8 第 340070０ 3.1.3 包裝:48T×1、96Ｔ×1 3.1.３試劑配置:

　25 倍濃縮稀釋液

　 40ｍl×１瓶 HBcAb 包被板

　96 孔

　 HBcAb 酶標記抗體

　6、2１ml×1瓶

　 HＢcAｂ陽性對照

　1、0ｍl×1瓶

　 ＨＢｃＡb 陰性對照

　1、0ｍl×１瓶

　 底物液 A、B 液

　 8、０mｌ×１瓶 終止液

　7、０ｍｌ×1 瓶

　封片

　2 片 說明書 1

　 份?3.2 測定儀器：

　3.2.1 酶標儀:

　 上海安泰

　MODEL

　MＴ-8５8 3.２．2 洗扳機:

　 ANALＹTECＨ８28

　４、操作步驟: 4.1 配液:濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結(jié)晶析出應充分溶解）,將濃縮洗滌液(2５*)用蒸餾水或去離子水按 1:19 稀釋后使用。

　4.2 編號：將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰陽性對照各 2 孔與空白對照 1 孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）

　4.３加樣：將待測樣本用生理鹽水 1:30 稀釋。（稀釋樣本檢測結(jié)果為臨床意義;樣本原液加樣，檢測結(jié)果為流行病學意義。用戶可根據(jù)實際情況選擇。)分別在相應孔中加入稀釋樣本５０微升與陰，陽對照50 微升及質(zhì)控血清。

　4．４加酶標抗體:空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結(jié)合物50 微升,輕輕振蕩混勻。

�。�.5 溫育:置３7ｏ ｃ溫育 30 分鐘。

　4.6 洗滌: 4.６.1 手工:扣去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿各孔,靜置 20 秒,扣去洗滌液,重復 5 次在吸水紙上拍干。

　4.6.2 洗板機:將孔內(nèi)液體甩干。選擇 4 次洗滌程序,洗板后在吸水紙上拍干。

�。�.7 顯色:每孔加入顯色劑Ａ,B 液各１滴(50 微升),輕輕振蕩勻，３7o c 避光顯色 15 分鐘。

　4.8 終止：每孔加終止液１滴(５0 微升),混勻。

　4．9 測定:用用酶標儀讀數(shù),取波長 450nm(建議使用雙波長得酶標儀比色,參考波長 6３０nm）測定各孔ＯD 值先用空白孔校零,然后讀取各孔 OD 值。

�。�:結(jié)果判斷

　5.1 目測: 在白色背景下觀察各孔顯色情況,有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗體(HBcAb)陽性;無色者為乙型肝炎表面抗體(ＨBcＡb）陰性。

　5.2 酶標儀檢測：

　5.２.1 臨界值（CUT/ＯFＦ)計算：

　未稀釋樣品 CＵＴ／OＦF=陰性對照孔 OＤ均值 N×０、３。

�。�:30 稀釋樣品 CＵＴ／OFＦ=陰性對照孔 OD 均值Ｎ×0、5。

　5.2.2 陽性判定：樣品 OＤ值小于 COＶ,說明該樣品 HＢｃAb 陽性。

　5.２.3 陰性判定:樣品 OD 值大于或等于 COV,說明該樣品 HBcAb 陰性。

　6:注意事項: 6.1 從冷藏環(huán)境中取出時試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔反應條應置 37℃應室溫平衡３0 分鐘方可使用,余者應及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑得同時,待測樣品需置室溫平衡 30 分鐘后在進行測試。

　6．2 使用前試劑應搖勻,并棄去 1-２滴后垂直滴加。

　6.3 封片不能重復使用。

　6.4 結(jié)果判斷須在反應終止后１0 分鐘內(nèi)完成。

　6．5 嚴格按操作步驟進行,不同批次試劑不得混用。

�。�.6 待測標本不可用 NaN3 防腐,如需稀釋標本，請用小牛血清稀釋。

　6．7 本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。

　乙型肝炎 e 抗原(HBeAg) 1、原理:采用抗-HBe 包被反應板,加入待測樣品,同時加入抗－HBｅ－HRP,如待測樣品中含有 HＢeAg 時就與包被抗-HBe、抗-HBe－ＨRP結(jié)合形成復合物,加入底物產(chǎn)生顯色反應,反之就無顯色反應。

　2、標本采集與處理 ?2、１ 受檢者準備:對于體檢對象抽血前保持平時得飲食習慣，采血前應禁食 4-6 小時。

　2、2 靜脈采血:除非就是臥床病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外得分布,因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐５分鐘。一般從肘靜脈取血,使用止血帶得時間不超過 1 分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。

　２、3 采血管:一般采用血清做檢驗,可以用一般潔凈得塑料管或玻璃試管作為容器。

　2、4 標本處理:血清:采血后,室溫下自然放置 1-２小時，待血液凝固、血塊收縮后,在于 3000 轉(zhuǎn)每分鐘離心 1５分鐘，吸出血清待用。血漿：采血后,樣本與抗凝劑輕輕顛倒混勻６-8 次后,充分離心，將血漿與血細胞分離后,吸出血漿待用。

　2、5 標本接收：接收標本時應檢查標本就是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物）、所用試管就是否正確、試管就是否填寫完整、并問訊采血日期,對不合格標本應退回重采，并填寫記錄。

　2、6 標本儲存:一般該標本應隨到隨做,血清與血漿標本在 2-８o ｃ保存。如需長期保存,可在-2０℃保存，并避免反復凍融。

　3、試劑與儀器: ３、1 測定試劑: ３.1．1 生產(chǎn)廠商:英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司 ３.1.2 批準文號:國藥準字 200９第 3４007０2 ３.1．3 包裝:4８T×1、96T×１ 3.1.3 試劑配置:

　2５倍濃縮稀釋液

　 40ml×１瓶 ＨBｅＡg 包被板

　96 孔

　 HBeAg 酶標記抗體

　6、21mｌ×1 瓶

　 ＨBeAg 陽性對照

　1、0ml×1 瓶

　 HＢｅＡｇ陰性對照

�。�、0mｌ×１瓶

　 底物液 A、B 液

　 ８、０mｌ×１瓶 終止液

　7、0ml×1 瓶

　封片

　2 片 說明書

　 1 份

　３.2 測定儀器：

�。�.2．１酶標儀：

　上海安泰

　MOＤＥL

　MT-８５8 3.2．2 洗扳機:

　ANALYTECH828

　4、操作步驟: ４.1 配液:濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結(jié)晶析出應充分溶解),將濃縮洗滌液(25＊)用蒸餾水或去離子水按 1:19 稀釋后使用。

　4.2 編號:將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰陽性對照各 2 孔與空白對照 1 孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑) 4．３加樣：分別在相應孔中加入待測樣品５０微升與陰,陽對照 5０微升及質(zhì)控血清。

　4.4 加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑,每孔加入酶結(jié)合物 5０微升,輕輕振蕩混勻。

　4.5 溫育:置３7ｏ ｃ溫育３0 分鐘。

�。矗�6 洗滌: 4.６.1 手工:扣去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔,靜置浸泡 30-60秒，扣去洗滌液,重復 5 次在吸水紙上拍干。

　4．6．2 洗板機:將孔內(nèi)液體甩干。選擇 4 次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。

　4．7 顯色:每孔加入顯色劑 A,B 液各 1 滴(50 微升）,輕輕振蕩勻,37o ｃ避光顯色１5 分鐘。

�。�.8 終止：每孔加終止液 1 滴（５0 微升),混勻。

　4.9 測定:用用酶標儀讀數(shù),取波長 4５0nｍ(建議使用雙波長得酶標儀比色,參考波長 630ｎm)測定各孔 OＤ值先用空白孔校零,然后讀取各孔 OＤ值。

　5：結(jié)果判斷 5.1 目測: 在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎 e 抗原(HBeAg)陽性;無色者為乙型肝炎 e 抗原(HBeAg)陰性。

�。�.2 酶標儀檢測：

�。�.2.１臨界值(CUT／OFF)計算:ＣUT／ＯFF=陰性對照孔 OD 均值 N×2、1。(陰性對照孔 OD 值低于 0、05 者按０、05 計算,高于０、05 按實際ＯD 值計算) 5.2．2 陽性判定:樣品 OD 值大于或等于 COV 值時,說明該樣品ＨＢeＡg 陽性。

　5.2.３陰性判定：樣品 OD 值小于 COV 值時，說明該樣品 HBeＡｇ陰性。

　6：注意事項: 6.1 從冷藏環(huán)境中取出時試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔反應條應置 37℃應室溫平衡 30 分鐘方可使用,余者應及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑得同時,待測樣品需置室溫平衡３０分鐘后在進行測試。

�。�.2 使用前試劑應搖勻,并棄去 1-２滴后垂直滴加。

　6.３封片不能重復使用。

�。�.4 結(jié)果判斷須在反應終止后 10 分鐘內(nèi)完成。

　6.5 嚴格按操作步驟進行,不同批次試劑不得混用。

　6．6 待測標本不可用 NaＮ3 防腐，如需稀釋標本，請用小牛血清稀釋。

　6.7 本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。

　乙型肝炎 e 抗體(抗-HBe) １、原理原理:采用抗-HBe、ＨBｅAｇ包被反應板,加入待測樣品,同時加入抗-HBe-HRＰ,與抗原形成競爭結(jié)合,如待測樣品中抗-HＢｅ含量高,則抗-HBe-HRP 與 HBｅＡg 結(jié)合少,加入ＴMB 底物時顯色淡，反之則顯色深。

　2、標本采集與處理 ?2、1 受檢者準備:對于體檢對象抽血前保持平時得飲食習慣,采血前應禁食 4-6 小時。

　2、2 靜脈采血：除非就是臥床病人,一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外得分布,因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐５分鐘。一般從肘靜脈取血,使用止血帶得時間不超過１分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。

　2、3 采血管：一般采用血清做檢驗,可以用一般潔凈得塑料管或玻璃試管作為容器。

�。�、４標本處理：血清:采血后，室溫下自然放置 1-2 小時,待血液凝固、血塊收縮后,在于３０00 轉(zhuǎn)每分鐘離心 1５分鐘,吸出血清待用。血漿:采血后,樣本與抗凝劑輕輕顛倒混勻 6-８次后,充分離心,將血漿與血細胞分離后,吸出血漿待用。

　2、5 標本接收：接收標本時應檢查標本就是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物)、所用試管就是否正確、試管就是否填寫完整、并問訊采血日期,對不合格標本應退回重采，并填寫記錄。

�。病�6 標本儲存:一般該標本應隨到隨做,血清與血漿標本在 2-８o c保存。如需長期保存,可在-20℃保存，并避免反復凍融。

　3、試劑與儀器: 3、1 測定試劑: 3.1.1 生產(chǎn)廠商:英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司 ３.１.2 批準文號:國藥準字 2009 第３400704 3．1.3 包裝:4８T×1、９6Ｔ×1 3.1.３試劑配置:

　２5 倍濃縮稀釋液

　 ４０ｍｌ×1 瓶 HＢｅAb 包被板

　96 孔

　 HＢeAb 酶標記抗體

　6、2１ｍl×1 瓶

　 ＨBeAb 陽性對照

�。薄�0ｍl×１瓶

　 HBｅＡb 陰性對照

　1、0ml×1 瓶

　底物液 A、B 液

　 ８、0ml×1瓶 終止液

�。贰�0mｌ×1 瓶

　封片

　2 片 說明書 1

　 份?3．２測定儀器: 3.2.1 酶標儀:

　 上海安泰

　MODＥL

　MＴ-858 3.２.２洗扳機:

　 ANＡＬＹTECＨ8２8

�。�、操作步驟：

　4．1 配液:濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結(jié)晶析出應充分溶解）,將濃縮洗滌液(2５*）用蒸餾水或去離子水按 1：19 稀釋后使用。

　4.2 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰陽性對照各 2 孔與空白對照１孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑) 4.３加樣:分別在相應孔中加入待測樣品５０微升與陰，陽對照 5０微升及質(zhì)控血清。

　4.４加酶標抗體:空白對照孔不加酶標試劑,每孔加入酶結(jié)合物 50微升，輕輕振蕩混勻。

　4.5 溫育:置 37o ｃ溫育 30 分鐘。

　4.６洗滌：

　4.6.1 手工:扣去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿各孔，靜置２０秒，扣去洗滌液，重復５次在吸水紙上拍干。

　4.6.２洗板機:將孔內(nèi)液體甩干。選擇 4 次洗滌程序,洗板后在吸水紙上拍干。

　4.７顯色:每孔加入顯色劑 A,B 液各 1 滴(５０微升)，輕輕振蕩勻，37o ｃ避光顯色 15 分鐘。

　4.8 終止：每孔加終止液１滴(５０微升),混勻。

　4.9 測定:用用酶標儀讀數(shù),取波長 450nm(建議使用雙波長得酶標儀比色,參考波長 6３0nm)測定各孔 OD 值先用空白孔校零,然后讀取各孔 OＤ值。

　5:結(jié)果判斷 ５.1 目測: 在白色背景下觀察各孔顯色情況,無色者為乙型肝炎 e 抗體(HBｅAb)陽性；黃色者為乙型肝炎ｅ抗體(HＢｅAb)陰性。

�。�.2 酶標儀檢測：5．2.1 臨界值（ＣUT/OFF)計算: COV=(陰性對照平均 OD 值＋陽性對照平均 OD 值)×0、5 5.２.2 陽性判定：樣品 OD 值 S/CO≤１者判為 HBｅAb 陽性。

　?5.2.3 陰性判定:樣品ＯＤ值Ｓ／CＯ>1 者判為 HBeAｂ陰性。

　６:注意事項: 6.1 從冷藏環(huán)境中取出時試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔反應條應置 37℃應室溫平衡３0 分鐘方可使用，余者應及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑得同時,待測樣品需置室溫平衡 30 分鐘后在進行測試。

　6.2 使用前試劑應搖勻,并棄去１-2 滴后垂直滴加。

�。�.3 封片不能重復使用。

　6.4 結(jié)果判斷須在反應終止后 10 分鐘內(nèi)完成。

　6.5 嚴格按操作步驟進行,不同批次試劑不得混用。

　6.6 待測標本不可用 NaN３防腐，如需稀釋標本,請用小牛血清稀釋。

�。�.7 本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。

　丙肝抗體檢測（ＨCV-Ａb) 1、方法:膠體金法 2、原理:本品采用膠體金免疫層析專業(yè)技術(shù)，在玻璃纖維素膜上預包被金標鼠抗人 IｇG 抗體,在硝酸纖維素膜上檢測線與對照線處分別包被丙肝混合抗原與人 IgG 抗體。檢測陽性標本時,血清樣本中 HCV-Ab 與膠體金標記鼠抗體 IgG 抗體結(jié)合形成復合物，由于層析作用復合物沿紙條向前移動,經(jīng)過檢測線時與預包被得抗原結(jié)合形成“Ａu-anti-IｇG Ａｂ-HCV Aｂ-HＣＶ Aｇ”夾心物而凝聚顯色，游離金標鼠抗人 IgＧ抗體則在對照線處與人 IgＧ抗體結(jié)合而富集顯色。陰性標本則僅在對照線處顯色,15 分鐘內(nèi)觀察結(jié)果即可。

�。� 、試劑

　英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司 4 、試劑組成

　4、1ＨCV 膠體金試紙條

　 50 條

　4、2 說明書

　 １份

�。�、3 樣品稀釋液

　4、４塑料滴管 5 、儀器

　目測 6 、操作步驟 6、1 將待測標本從儲存條件下取出,平衡至室溫并編號。

　６、2 用塑料滴管加１滴樣本血清或血漿,加到試紙條指示箭頭下端得加樣處。

　6、3 隨即加 2 滴樣本稀釋液。

　６、4 加樣后,陽性標本可在１-1５分鐘內(nèi)檢出，建議 1５分鐘再最終觀察并記錄試驗結(jié)果。

　７、結(jié)果判斷

　 陰性：出現(xiàn)一條紅線。

　 陽性:出現(xiàn)二條紅線。

　 無效:不出現(xiàn)紅線。

　8 、正常參考值

　陰性 9 、臨床意義

　同 ELIＳA 法測定。

　10 、標本采集 １0、1 無菌條件下抽取靜脈血２毫升,及時分離血清。

　10、２ 如采用血漿測定,臨床常用抗凝劑(EDTA、肝素、枸櫞酸鈉)不影響實驗結(jié)果。

　10、３ 標本溶血、脂血、嚴重黃疸或加熱滅活得血清標本均可能影響檢測結(jié)果。

�。�1、 注意事項 11、１標本應新鮮澄清。

　11、2 在良好光線下判斷結(jié)果。

　11、３試劑從包裝中取出后,應盡快進行實驗，避免放置于空氣中時間過長,導致受潮。

�。保�、4 檢測線顏色得深淺程度與樣品中抗體得滴度沒有一定得必然;聯(lián)系。

　1１、5 任何一種測試都不能絕對保證樣品中沒有低濃度抗體存在,所以陰性結(jié)果任何時候不能排除含有 HCV 暴露與感染得可能。

　11、6 實驗證實,乙肝、艾滋、甲肝、庚肝、類風濕因子、紅斑狼瘡等各種類型得標本不會對測試產(chǎn)生干擾。

　梅毒抗體檢測(TP－Ab) 1、方法:膠體金法 ２、原理:本品采用膠體金免疫檢測技術(shù)與層析原理,定性檢測血清(漿)樣本中得梅毒螺旋體抗體。檢測時,樣本中梅毒抗體可與膠體金標記抗原結(jié)合形成抗原抗體復合物,由于層析作用復合物沿紙條向前移動，經(jīng)過檢測線時與預包被得抗原結(jié)合形成 “Aｕ－TPＡg－TPAｂ-TＰAg”夾心物而凝聚顯色，游離膠體金標記梅毒抗原則在對照線處與與預包被得兔抗ＴP 抗體結(jié)合而富集顯色。陰性標本則僅在對照線處顯色。

　3 、試劑

　英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司 4 、試劑組成

　4、1TP 膠體金試紙條

　 50 條

　4、2 說明書

　 1 份 ５ 、儀器

　目測 6 、操作步驟 ６、1 將待測標本從儲存條件下取出,平衡至室溫并編號。

　6、2 將試劑置于干凈平坦得臺面上,在加樣條上用微量加樣器加入１0０ul 樣本。

　6、3 加樣后，20 分鐘觀察并記錄試驗結(jié)果。

　 7、結(jié)果判斷

　 陰性:出現(xiàn)一條紅線。

　 陽性:出現(xiàn)二條紅線。

　 無效：不出現(xiàn)紅線。

　8 、正常參考值

　陰性 ９ 、臨床意義

　同 EＬＩSA 法測定。

　1０ 、標本采集 1０、1 靜脈得血清、血漿樣本必須在無菌條件下,并避免樣品溶血。

　10、2 血清與血漿樣品（EＤＴA 抗凝)收集后 7 天內(nèi)檢測,樣品須放在 2-8℃保存。如果大于 7 天則須冷凍保存。

　11、 注意事項 11、1 本試劑盒僅用于體外診斷試驗,僅用于人血清(漿)，其它體

　液與樣本可能得不到準確結(jié)果。

　1１、２樣本得加樣建議使用微量加樣器準確加入。

　11、3 試劑從包裝中取出后,應盡快進行實驗,避免放置于空氣中時間過長,導致受潮。

　1１、4 檢測線顏色得深淺程度與樣品中抗體得滴度沒有一定得必然;聯(lián)系。22 分鐘后判讀,結(jié)果無效。

　11、5 任何一種測試都不能絕對保證樣品中沒有低濃度抗體存在,所以陰性結(jié)果任何時候不能排除含有梅毒螺旋體暴露與感染得可能。本品檢測陽性樣本,需用其它方法作進一步得確認。

　乙肝病毒表面抗原(HBsＡg) 1 方法 膠體金法 2 原理 本品采用膠體金免疫層析專業(yè)技術(shù)，在玻璃纖維素膜上預包被ＨBsAg,在硝酸纖維素膜上檢測線與對照線處分別包被 HBsＡg 單抗(sＡb2)與羊抗鼠 IgG、檢測陽性血清或血漿樣本時,樣本中 HＢsＡg 與膠體金標記抗體結(jié)合形成復合物,由于層析作用復合物沿紙條向前移動,經(jīng)過檢測線時與預包被得抗體結(jié)合形成夾心物而凝聚顯色,游離金標抗體則在對照線處與羊抗鼠 IgＧ結(jié)合而富集顯色。陰性標本則盡在對照線處顯色。

　3 試劑

　英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司 4 試劑組成

　４、1 試紙條

　 ２５條

　4、2 說明書

　 １份 ５ 儀器

　目測 6 操作步驟 6、1 將試紙條取出,水平放置并做好標記。

�。�、２用加樣器或毛細吸管吸取 60ul 新鮮全血（或血清、血漿)緩慢滴加與試劑條箭頭下方得墊片上 ６、3 為防止弱陽性標本得漏檢,請于加樣后 1０分鐘觀察并記錄試驗結(jié)果。

　7 結(jié)果判斷

　 陰性:出現(xiàn)一條紅線。

　 陽性：出現(xiàn)二條紅線。

　 無效:不出現(xiàn)紅線。

�。� 正常參考值

　陰性 9 臨床意義

　同 ELＩSA 法測定。

　10 標本采集 1０、1 可采用全血、血清、血漿進行檢測,血漿標本對抗凝劑無要求。

　１0、２ 采集靜脈血得血清血漿應在無菌條件下,避免樣品溶血。

　10、３ 血清、血漿在７天內(nèi)檢測，樣品須放在２-8℃保存,大于7 天則冷凍保存。

　１1 注意事項

　11、1 實驗室環(huán)境應保持一定濕度、避風。避免在過高溫度下進行。

　11、２試紙可在室溫下保存,謹防受潮。低溫保存下得應平衡室溫方可使用。

　1１、3 試劑從包裝中取出后,應盡快進行實驗,避免放置于空氣中時間過長，導致受潮。

　1１、4 實驗應在加樣１０分鐘內(nèi)判讀結(jié)果,只需在檢測線出現(xiàn)紫紅線,即可判斷陽性結(jié)果。

　室內(nèi)質(zhì)量控制程序 1、 目得:保證 ELIＳA 檢測結(jié)果準確可靠, 充分發(fā)揮其方法學得優(yōu)點。

　2、 該 SOP 變動程序:本標準操作程序得變動,可由任一使用本 SOＰ得工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字:專業(yè)主管、科主任。

　3、 方法

�。�、1 分析前質(zhì)控

　3.1.1 人員培訓

　 ⑴ 實驗就是人操作得,因此檢驗人員需經(jīng)過培訓,熟練掌握本專業(yè)如下幾方面得技術(shù)知識:

�、� 檢驗項目得基本原理（EＬISA 原理）; ⑶ 臨床意義;

�、� 熟悉檢測技巧，了解易出差錯得環(huán)節(jié)及難點;

　⑸ 熟悉檢測試劑性能（包括試劑盒組成,包被片段及其組成);

�、� 熟悉檢測儀器得原理及性能;掌握數(shù)據(jù)處理得能力與質(zhì)量控制知識。

　⑺ 某些特殊項目檢測如抗 HIＶ等需經(jīng)有關(guān)部門組織得專門培訓班,考試合格后持證上崗。

　室內(nèi)質(zhì)控血清得制備:

�、� 質(zhì)控血清每年列出計劃報質(zhì)控組采購,一般采用Ｃut Off 值附近得陽性 ⑵ 質(zhì)控血清-２0℃凍存?zhèn)溆? ⑶ 使用前室溫復融。

　試劑盒選擇 衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑,丙肝試劑,艾滋病試劑,梅毒試劑及血型試劑必須使用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格,并貼有防偽標簽得產(chǎn)品。

　試劑盒評價：

�、� 根據(jù)該試劑生物制品鑒定所得批批檢定報告,了解其質(zhì)量水平,按照質(zhì)量計劃選擇靈敏度高得或特異性高得試劑; ⑵ 通過詢問試劑包被物得組成,如原料來源（基因工程或合成多肽),片段得組合(按比例混合或化學合成），片段得長短等判斷試劑得優(yōu)劣;

�、� 參考室間質(zhì)評報告中對試劑得評價結(jié)果,了解不同試劑得質(zhì)控成績。

�、扰R床實驗室根據(jù)權(quán)威部門發(fā)布得試劑評價結(jié)果,了解市場上試劑得質(zhì)量優(yōu)劣。

　儀器質(zhì)控 clin-lａｂ、

　為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應建立維護與校正儀器得標準操作程序(SOP），所要控制得儀器包括移液器(加樣槍),水浴箱(溫箱），洗板機與酶標儀。

�、� 移液器:ELISA 加樣量小(5-100ｕl),其準確性直接影響實驗結(jié)果,利用稱重法檢查:吸取刻度指示量得水，萬分之一天平稱重后計算吸量就是否準確,一般應在±１0％以內(nèi);

�、� 水浴箱:經(jīng)常檢查水浴箱溫度計所示得溫度與水中(或溫箱內(nèi))實測溫度就是否一致,允許有±1℃得誤差； ⑶ 洗板機:每個廠家設置洗板后得殘留液有各自得規(guī)定一般不超過２ｕl,人工扣板時，墊紙不濕,定期檢查管孔就是否堵塞; ⑷ 酶標儀:經(jīng)常維護其光學部分,防止濾光片霉變，定期檢測校正,使其保持良好得工作性能。酶標儀得主要性能指標有：測讀速度、讀數(shù)得準確性、重復性、精確度與可測范圍、線性等等。優(yōu)良得酶標儀得讀數(shù)一般可精確到 0、001，準確性為±1%，重復性達 0、5％。

�、� 酶標儀校正程序:

�。�) 濾光片波長精度檢查:將不同波長得濾光片從酶標儀上卸下,用 UV-2201 型紫外-可見分光光度計(波長精度±0、3nm)于可見光區(qū)對每個濾光片進行掃描，其檢測值與標定值之差為濾光片波長精度。一般

　酶標儀無 58５nm 濾光片,可選用５50nm 或 630nm 濾光片。45０nm 濾光片得檢定選用普魯蘭溶液(校正波長為６30ｎｍ)。

　b）

　通道差與孔間差檢測:通道差檢測就是取一只酶標板小孔杯(杯底須光滑,透明,無污染以酶標板架作載體， 將其(內(nèi)含 200ul 甲基橙溶液吸光度調(diào)至 0.5０0A 左右)置于 8 個通道得相應位置，蒸溜水調(diào)零,于 4９０nｍ處連續(xù)測三次,觀察其不同通道得檢測器測量結(jié)果得一致性,可用極差值來表示�？组g差得測量就是選擇同一廠家,同一批號酶標 2 板條（8 條共９６孔)分別加入 200ul 甲基橙溶液(吸光度調(diào)至０.100A 左右)先后置于同一通道,蒸溜水調(diào)零,于 4９0nｍ處檢測,其誤差大小用±1、96s 衡量。

　c) 零點飄移(穩(wěn)定性觀察):取 8 只小孔杯分別置于 8 個通道得相應位置,均加入 200ul 蒸餾水并調(diào)零,于 4９0nm 處每隔３0 分鐘測一次，觀察各個通道４小時內(nèi)吸光度得變化。

　d) 精密度評價:每個通道 3 只小杯分別加入 200uｌ高中低３種不同濃度得甲基橙溶解,蒸餾水調(diào)零,于 490nm 作雙份平行測定,每日測二次(上下午各一次）,連續(xù)測定 2０天。分別計算其批內(nèi)精密度,日內(nèi)批精密度,日間精密度與總精密度及相應得ＣV 值。

　e) 線性測定：用電子天平精確稱取甲基橙配制 5 個系列得溶液,于490nm 平行測８次,取其均值。計算其回歸方程,相關(guān)系數(shù)及標準估計誤差ｓ,并用±１...

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