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HPLC測(cè)定通關(guān)藤藥材及消癌平片中通關(guān)藤苷A含量

發(fā)布時(shí)間:2019-08-28 來(lái)源: 感悟愛(ài)情 點(diǎn)擊:


  摘要:目的 建立通關(guān)藤藥材及消癌平片中通關(guān)藤苷A的高效液相色譜含量測(cè)定方法。方法 色譜柱:Sinochrom ODS-BP分析柱(250 mm×4.6 mm,5 ?m);流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸(41∶59);檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm。結(jié)果 通關(guān)藤苷A在0.996~19.92 ?g范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系,r=0.999 95,平均加樣回收率為96.6%,RSD=2.19%(n=6)。結(jié)論 本方法操作簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確,穩(wěn)定性和重復(fù)性好,可用于通關(guān)藤藥材及消癌平片的含量測(cè)定及質(zhì)量控制。
  關(guān)鍵詞:通關(guān)藤;消癌平片;通關(guān)藤苷A;高效液相色譜法
  DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2013.03.021
  中圖分類號(hào):R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1005-5304(2013)03-0055-03
  通關(guān)藤,又名烏骨藤、通光散、通光藤等,是蘿藦科牛奶菜屬植物通關(guān)藤M(fèi)arsdenia tenacissima(Roxb).Wight et Arn的干燥莖、藤[1],主要分布于貴州、云南、廣西等地。通關(guān)藤含有多種化學(xué)成分,包括C21甾體苷類、三萜皂苷類、多糖類、醇類、揮發(fā)油、生物堿、有機(jī)酸類等化學(xué)成分。消癌平片是由通關(guān)藤制成的單方制劑,具有清熱解毒、止咳平喘、散結(jié)止痛、抗癌之功效[1]。通關(guān)藤提取物在體外對(duì)胃癌、肝癌、食管癌等癌細(xì)胞具有抑制作用[2-4]。已有研究表明,C21甾體皂苷類為通關(guān)藤中主要抗腫瘤成分[5]。然而,目前文獻(xiàn)報(bào)道的消癌平制劑多以綠原酸的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)。本研究擬建立通關(guān)藤苷A的高效液相色譜(HPLC)含量測(cè)定方法,為規(guī)范通關(guān)藤藥材及其制劑的質(zhì)量提供依據(jù)。
  1 儀器與試藥
  Agilent1100高效液相色譜儀,包括Agilent G1321A四元泵、G1322A真空在線脫氣機(jī)、G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1315 DAD二極管陣列檢測(cè)器、Agilent安捷倫化學(xué)工作站;KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);BP211D電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)。
  通關(guān)藤苷A對(duì)照品(純度≥98.3%),山西省中醫(yī)藥研究院方劑研究所自制。5批消癌平片(批號(hào)091220、091221、091222、091224、091227),江蘇天禾制藥有限公司生產(chǎn)。乙腈為色譜純,水為超純水,其他試劑均為分析純。
  通關(guān)藤藥材經(jīng)山西省中醫(yī)藥研究院李先榮主任藥師鑒定。采收時(shí)間及產(chǎn)地見(jiàn)表1。
  2 方法與結(jié)果
  2.1 供試品溶液的制備
  取通關(guān)藤藥材過(guò)60目篩粉末1 g,精密稱定,置于錐形瓶中,加入40 mL甲醇,超聲30 min(功率150 W,頻率40 kHz),濾過(guò),濾液濃縮,定容于10 mL量瓶中,即得通關(guān)藤藥材供試品溶液。
  稱取消癌平片20片,去包衣,精密稱定,碾細(xì),取2.4 g粉末,加120 mL蒸餾水于燒杯中溶解。濾過(guò),濾液用氯仿萃取3次,每次30 mL,收集氯仿層,合并萃取液,水浴蒸干,甲醇定容至5 mL,即得消癌平片供試品溶液。
  2.2 對(duì)照品溶液的制備
  稱取通關(guān)藤苷A 10 mg,精密稱定,置于10 mL量瓶中,用甲醇溶解,定容,即得0.996 mg/mL對(duì)照品溶液。
  2.3 色譜條件
  色譜柱:Sinochrom ODS-BP分析柱(250 mm×4.6 mm,5 ?m);流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸(41∶59);檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm;進(jìn)樣量:10 ?L;柱溫:室溫。理論塔板數(shù)按通關(guān)藤苷A峰計(jì)算應(yīng)不低于1 500。通關(guān)藤苷A峰型良好,色譜圖見(jiàn)圖1。
  2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
  分別精密吸取通關(guān)藤苷A對(duì)照品溶液1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 ?L,注入高效液相色譜儀,依法測(cè)定,以通關(guān)藤苷A進(jìn)樣量(?g)為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得回歸方程Y=441 389X-62.216,r=0.999 95。結(jié)果表明,通關(guān)藤苷A進(jìn)樣量在0.996~19.92 ?g范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。
  2.5 精密度試驗(yàn)
  精密吸取上述對(duì)照品溶液10 ?L,注入高效液相色譜儀,重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積。結(jié)果RSD=0.13%(n=6),表明儀器精密度良好。
  2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
  精密吸取同一供試品溶液10 ?L,注入高效液相色譜儀,分別于0、2、4、8、16、24 h測(cè)定峰面積。結(jié)果RSD=1.16% (n=6),表明供試品溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。
  2.7 重復(fù)性試驗(yàn)
  取同一產(chǎn)地通關(guān)藤藥材1 g,6份,按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別精密吸取各供試品溶液10 ?L,注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積。結(jié)果通關(guān)藤苷A平均含量為0.142 55 mg/g, RSD=2.34%(n=6),表明方法重復(fù)性良好。
  2.8 加樣回收率試驗(yàn)
  取0.5 g通關(guān)藤藥材(SS8)3份,分別加入5 mL通關(guān)藤苷A和甲醇35 mL,按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別精密吸取各供試品溶液10 ?L,注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積積分值,計(jì)算回收率分別為98.2%、97.4%、94.2%,平均回收率為96.6%,RSD=2.19%(n=6)。
  2.9 樣品含量測(cè)定
  取“2.1”項(xiàng)下配制的不同產(chǎn)地通關(guān)藤供試品溶液及消癌平片供試品溶液分別注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積積分值,由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算質(zhì)量,從而算出藥材及消癌平片中所含對(duì)照品通關(guān)藤苷A的含量,結(jié)果見(jiàn)表2、表3。
  3 討論
  通過(guò)對(duì)通關(guān)藤苷A對(duì)照品和不同產(chǎn)地通關(guān)藤藥材掃描,最大吸收波長(zhǎng)均在223 nm處,所以檢測(cè)波長(zhǎng)采用223 nm。本試驗(yàn)所采用的含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單,重復(fù)性良好,可用于通關(guān)藤苷A的含量測(cè)定。
  不同產(chǎn)地通關(guān)藤藥材中通關(guān)藤苷A含量差異大。明顯可分為3個(gè)范圍:藥材SS1、SS8、SS9接近,在0.9%左右;藥材SS3、SS5、SS7、SS6相差不大,在0.5%~0.6%之間;藥材SS2、SS4中含量相對(duì)較低。
  消癌平片為通關(guān)藤藥材的水提物制劑,前期用D101及ZTC樹(shù)脂處理過(guò)該片劑,但雜質(zhì)峰明顯,且操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí),后改用液-液萃取法,得到的溶液中雜質(zhì)含量低,操作簡(jiǎn)便省時(shí),不影響通關(guān)藤苷A的含量測(cè)定,可用于消癌平片中通關(guān)藤苷A的含量測(cè)定。
  參考文獻(xiàn):
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 。ㄊ崭迦掌冢2012-07-08,編輯:陳靜)

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