吳茱萸及其習(xí)用品藥材中7個(gè)成分的HPLC含量測(cè)定
發(fā)布時(shí)間:2019-08-28 來(lái)源: 感恩親情 點(diǎn)擊:
[摘要]建立HPLC同時(shí)測(cè)定吳茱萸及其習(xí)用品藥材中檸檬苦素、吲哚類生物堿(14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸堿和吳茱萸次堿)及喹諾酮類生物堿(1-甲基-2-正十一烷基-4(1H)-喹諾酮、吳茱萸卡品堿和二氫吳茱萸卡品堿)含量的方法。采用YMC C18 (4.6 mm ×250 mm,5 μm) 色譜柱;流動(dòng)相為乙腈(A)-四氫呋喃(B)-5 mmol·L-1醋酸銨緩沖液(pH 3.8)(C),梯度洗脫;流速1.0 mL·min-1;柱溫30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)220,250 nm。7個(gè)成分的分離度良好,標(biāo)準(zhǔn)曲線在檢測(cè)范圍內(nèi)均呈良好線性,r=0.999 9。加樣回收率平均值為96.69%~102.4%,RSD為1.4%~3.1%。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,重復(fù)性好。對(duì)5種18批吳茱萸類藥材進(jìn)行含量測(cè)定,結(jié)果顯示7個(gè)被測(cè)成分在5種藥材中均有分布,但含量差異很大。16批正品吳茱萸中7個(gè)成分的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)在9.46~69.9 mg·g-1,平均為28.2 mg·g-1。密果吳萸中7個(gè)成分的總含量為25.8 mg·g-1,在正品含量范圍內(nèi),略低于平均值;臭辣吳萸中7個(gè)成分的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7.69 mg·g-1,低于正品的含量下限。密果吳萸和臭辣吳萸與正品吳茱萸相比,主要成分一致,含量總體低于正品吳茱萸。
[關(guān)鍵詞]吳茱萸;檸檬苦素;生物堿;含量測(cè)定;高效液相色譜法
吳茱萸為傳統(tǒng)中藥,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,列為中品。其性味辛、苦,熱,有小毒;具散寒止痛,降逆止嘔,助陽(yáng)止瀉的功效。主要用于治療厥陰頭痛,寒疝腹痛,寒濕腳氣等[1]。1977~2010年版《中國(guó)藥典》均收載吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa(Juss.) Benth.,石虎E. rutaecarpa(Juss.) Benth. var. officinalis (Dode) Huang或疏毛吳茱萸E. rutaecarpa(Juss.) Benth. var. bodinieri (Dode) Huang的干燥近成熟果實(shí)。這3種吳茱萸在中國(guó)秦嶺以南各地均有分布,是商品藥材中的主流品種。同屬的密果吳萸E.compacta Hand.-Mazz.和臭辣吳萸E. fargesii Dode也是民間重要藥材。密果吳萸為土家族民間常備藥,對(duì)治療胃痛、頭痛、心腹氣痛有良效[2]。湖北民間有用臭辣吳萸的果實(shí)做吳茱萸代用品,也有認(rèn)為本種的果與吳茱萸具有相同藥效[3]。吳茱萸的基源多樣性及分布廣泛性造成了各地吳茱萸的質(zhì)量差異。關(guān)于密果吳萸和臭辣吳萸的主要成分與正品吳茱萸相比是否一致,未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。
吳茱萸的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究報(bào)道很多,但所選指標(biāo)基本集中于吳茱萸堿、吳茱萸次堿和檸檬苦素[4-5]。2010年版《中國(guó)藥典》將這3個(gè)成分作為藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)成分。吳茱萸主要含生物堿類(吲哚類和喹諾酮類)、檸檬苦素類、黃酮類、揮發(fā)油類等化學(xué)成分[6]。Zhao Meng-yao等測(cè)定了12批吳茱萸中去氫吳茱萸堿等6個(gè)吲哚類生物堿的含量[7]。除吳茱萸堿等吲哚類生物堿外,喹諾酮類生物堿同樣是吳茱萸中含量較高的一類有效成分,存在于提取物的脂溶性部位。文獻(xiàn)報(bào)道吳茱萸中喹諾酮類生物堿具有抗幽門螺桿菌[8],抑制白三烯生物合成[9],抑制血管緊張素Ⅱ受體結(jié)合等作用[10],與吳茱萸的傳統(tǒng)功效具有相關(guān)性。因此,喹諾酮類生物堿也應(yīng)是吳茱萸的藥效成分之一,而該類成分因?qū)φ掌啡狈Χ缓雎裕浜繙y(cè)定研究?jī)H零星報(bào)道,如Wu Chang-chuang等測(cè)定了33批市售吳茱萸樣品中11個(gè)喹諾酮類生物堿的含量[11]。為了全面評(píng)價(jià)吳茱萸及其主要習(xí)用品的質(zhì)量,本文以《中國(guó)藥典》收錄的吳茱萸3種正品、臭辣吳萸、密果吳萸5種18批樣品為研究對(duì)象,以檸檬苦素,吲哚類生物堿(14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸堿、吳茱萸次堿),喹諾酮類生物堿(1-甲基-2-正十一烷基-4(1H)-喹諾酮、吳茱萸卡品堿、二氫吳茱萸卡品堿)7個(gè)主要成分的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),對(duì)目前我國(guó)吳茱萸主產(chǎn)地藥材和2批習(xí)用品藥材進(jìn)行系統(tǒng)比較,以探討其品質(zhì)差異,為進(jìn)一步完善吳茱萸的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)提供基礎(chǔ)性研究證據(jù)。
1材料
島津LC-20AT高效液相色譜系統(tǒng),包括四元梯度洗脫泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱和二極管陣列檢測(cè)器(日本島津公司),KQ-250DBX型數(shù)控超聲波清洗儀( 昆山市超聲儀器有限公司),XS105型1/10萬(wàn)電子天平( 瑞士梅特勒-托利多有限公司)。FW100高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)。
檸檬苦素(批號(hào)110800-200404,純度大于95%) 對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院,供含量測(cè)定用。14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸堿、吳茱萸次堿、1-甲基-2-十一烷基-4(1H)-喹諾酮、吳茱萸卡品堿和二氫吳茱萸卡品堿對(duì)照品為作者自制,并經(jīng)MS,NMR鑒定結(jié)構(gòu),HPLC檢測(cè),面積歸一化法計(jì)算純度均大于98%。甲醇、乙腈、四氫呋喃為色譜純(美國(guó)Fisher公司),水為娃哈哈純凈水,其他試劑均為分析純。
實(shí)驗(yàn)用藥材共18批見(jiàn)表1。密果吳萸由湖南中醫(yī)藥大學(xué)林麗美副教授采集于衡山并鑒定。其余樣品由作者實(shí)地采集或購(gòu)買,實(shí)地采集的樣品均由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所林余霖研究員鑒定,購(gòu)買的4批商品藥材由作者根據(jù)性狀、產(chǎn)地、化學(xué)成分等信息進(jìn)行鑒定。標(biāo)本保存于中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中心。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件 YMC C18色譜柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm);流動(dòng)相為乙腈(A)-四氫呋喃(B)- 5 mmol·L-1醋酸銨緩沖液(pH 3.8)(C);梯度洗脫(0~10 min,21%~23%A,10%B;10~30 min,23%~24%A,10%B;30~45 min,24%~26%A,10%B;45~50 min,26%A,10%B;50~53 min,26%~60%A,10%B;53~68 min,60%A,10%B;68~70 min,60%~80%A,10%B;70~80 min,80%A,10%B);流速1.0 mL·min-1;柱溫30 ℃; 檢測(cè)波長(zhǎng)220,250 nm。在上述色譜條件下,樣品中檸檬苦素、14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸堿、吳茱萸次堿、1-甲基-2-十一烷基-4(1H)-喹諾酮、吳茱萸卡品堿和二氫吳茱萸卡品堿色譜峰的保留時(shí)間與對(duì)照品一致,7個(gè)成分的色譜峰能達(dá)到較好的分離,且純度檢查符合要求,樣品其他成分對(duì)欲測(cè)成分的測(cè)定無(wú)干擾。吳茱萸樣品(貴州余慶)色譜圖見(jiàn)圖1。密果吳萸及臭辣吳萸的色譜圖見(jiàn)圖2。
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