典型實(shí)驗(yàn)室常用緩沖液配置方案
發(fā)布時(shí)間:2020-07-24 來(lái)源: 讀后感 點(diǎn)擊:
實(shí)驗(yàn)室常用緩沖液配置方案
1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0) 組份濃度:1 M Tris-HCl 配制量:1 L 配制方法:
1. 稱量121.1 g Tris 置于1 L 燒杯中。
2. 加入約800 ml 的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>
3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的 pH 值。
PH值
濃 HCl
7.4
約70ml
7.6
約60ml
8.0
約42ml
4. 將溶液定容至1 L。
5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH 值,因?yàn)?Tris 溶液的 pH 值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的 pH 值大約降低0.03個(gè)單位。
2)10×TE Buffer(pH7.4, 7.6, 8.0) 組份濃度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量:1 L 配制方法:
1. 量取下列溶液,置于1 L 燒杯中。
1M Tris-HCl Buffer(PH7.4,7.6,8.0)
100ml
500mM EDTA(PH8.0)
20ml
2. 向燒杯中加入約800 ml 的去離子水,均勻混合。
3. 將溶液定容至1 L 后,高溫高壓滅菌。
4. 室溫保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 組份濃度:1.5 M Tris-HCl 配制量:1 L 配制方法:
1. 稱量181.7 g Tris 置于1 L 燒杯中。
2. 加入約800 ml 的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>
3. 用濃鹽酸調(diào)節(jié) pH 值至8.8。
4. 將溶液定容至1 L。
5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH 值,因?yàn)?Tris 溶液的 pH 值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的 pH 值大約降低0.03個(gè)單位。
4)3 M 醋酸鈉(pH5.2) 組份濃度:3M 醋酸鈉 配制量:100ml 配制方法:
1.稱量40.8g NaAc·3H 2 O 置于100-200ml 燒杯中,加入月40ml 的去離子水?dāng)嚢枞芙?2.加入冰醋酸調(diào)節(jié) pH 值至5.2 3.加去離子水將溶液定容至100ml
4高溫高壓滅菌后,室溫保存。
5)PBS Buffer 組份濃度:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量:1 L 配制方法:
1. 稱量下列試劑,置于1 L 燒杯中。
NaCl
8g
KCl
0.2g
Na2 HPO4
1.42g
KH 2PO4
0.27g
2. 向燒杯中加入約800 ml 的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>
3. 滴加濃鹽酸將 pH 值調(diào)節(jié)至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1 L。
4. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:上述 PBS Buffer 中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子,如需要,可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
6)10 M 醋酸銨 組份濃度:10 M 醋酸銨
配制量:100 ml 配制方法:
1. 稱量77.1 g 醋酸銨置于100~200 ml 燒杯中,加入約30 ml 的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?/p>
2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。
3. 使用0.22 mm 濾膜過(guò)濾除菌。
4. 密封瓶口于室溫保存。
注意:醋酸銨受熱易分解,所以不能高溫高壓滅菌。
7) 苯酚/ 氯仿/ 異戊醇(25 : 24 : 1) 配制方法:
1. 說(shuō)明:從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯仿/異戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離,而異戊
醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。
2. 配制方法:將 Tris-HCl 平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24 : 1)混合均勻后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
8 )10 % (W/V) SDS 組份濃度:10% (W/V)SDS 配制量:100ml 配制方法:
1.稱量10g 高純度的 SDS 置于100-200ml 燒杯中,加入約80ml 的去離子水,68℃加入溶解 2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié) pH 值至7.2 3.將溶液定容至100ml 后,室溫保存。
9 )2 N NaOH 組份濃度:2 N NaOH 配制量:100 ml 配制方法:
1. 量取80 ml 去離子水置于100~200 ml 塑料燒杯中(NaOH 溶解過(guò)程中大量放熱,有可能使玻璃燒杯炸裂)。
2. 稱取8 g NaOH 小心地逐漸加入到燒杯中,邊加邊攪拌。
3. 待 NaOH 完全溶解后,用去離子水將溶液體積定容至100 ml。
4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后,室溫保存。
10 )2.5 N HCl 組份濃度:2.5 N HCl 配制量:100 ml 配制方法:
1. 在78.4 ml 的去離子水中加入21.6 ml 的濃鹽酸(11.6 N),均勻混合。
2. 室溫保存。
11 )5 M NaCl 組份濃度:5 M NaCl 配制量:1 L 配制方法:
1. 稱取292.2 g NaCl 置于1 L 燒杯中,加入約800 ml 的去離子水后攪拌溶解。
2. 加去離子水將溶液定容至1 L 后,適量分成小份。
3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
11 )20 % (W/V) Glucose 組份濃度:20% (W/V) Glucose 配制量:100 ml 配制方法:
1. 稱取20 g Glucose 置于100~200 ml 燒杯中,加入約80 ml 的去離子水后,攪拌溶解。
2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。
3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
12 )SolutionI( 質(zhì)粒提取用) 組份濃度:25 mM Tris-HCl(pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose 配制量:1 L 配制方法:
1. 量取下列溶液,置于1 L 燒杯中。
1M Tris-HCl(PH8.0)
25ml
0.5M EDTA(PH8.0)
20ml
20 %Glucose( 1.1145ml
M)
dH 2 O
910ml
2. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
3. 使用前每50 ml 的 Solution I 中加入2 ml 的 RNase A(20 mg/ml)。
13 )SolutionII( 質(zhì)粒提取用) 組份濃度:200mM NaOH,1%(W/V)SDS 配制量:500ml 配制方法:
1.量取下列溶液,置于500ml 燒杯中 10% SDS 50ml 2N NaOH 50ml 2.加滅菌水定容至500ml,充分混勻 3.室溫保存,此溶液保存時(shí)間最好不要超過(guò)一個(gè)月 注意:SDS 易產(chǎn)生氣泡,不要?jiǎng)×覕嚢?/p>
14 )SolutionIII( 質(zhì)粒提取用) 組份濃度:3 M KOAc, 5 M CH3COOH 配制量:500 ml 配制方法:
1. 稱量下列試劑,置于500 ml 燒杯中。
KOAc
147g
CH 3 COOH
57.5ml
2. 加入300 ml 去離子水后攪拌溶解。
3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。
4. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
15 )0.5 M EDTA(pH8.0) 組份濃度:0.5 M EDTA 配制量:1 L 配制方法:
稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O,置于1 L 燒杯中。
2. 加入約800 ml 的去離子水,充分?jǐn)嚢琛?/p>
3. 用 NaOH 調(diào)節(jié) pH 值至8.0(約20 g NaOH)。
注意:pH 值至8.0時(shí),EDTA 才能完全溶解。
4. 加去離子水將溶液定容至1 L。
5. 適量分成小份后,高溫高壓滅菌。
6. 室溫保存。
16 )1 M DTT
組份濃度:1 M DTT 配制量:20 ml 配制方法:
1. 稱取3.09 g DTT,加入到50 ml 塑料離心管內(nèi)。
2. 加20 ml 的0.01 M NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22 mm 濾器過(guò)濾除菌。
3. 適量分成小份后,-20℃保存。
17 )10 mM ATP 組份濃度:10 mM ATP 配制量:20 ml 配制方法:
1. 稱取121 mg Na2ATP·3H2O,加入到50 ml 塑料離心管內(nèi)。
2. 加20 ml 的25 mM Tris-HCl(pH8.0),攪拌溶解。
3. 適量分成小份后,-20℃保存。
一.常用貯液與溶液
1mol/L 亞精胺(Spermidine): 溶解2.55g 亞精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。
1mol/L 精胺(Spermine):溶解3.48g 精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。
10mol/L 乙酸胺(ammonium acetate):將77.1g 乙酸胺溶解于水中,加
水定容至1L 后,用0.22um孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。
10mg/ml 牛血清蛋白(BSA):加100mg 的牛血清蛋白(組分 V 或分子生物學(xué)試劑級(jí),無(wú) DNA 酶)于9.5ml 水中(為減少變性, 須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白),蓋好蓋后,輕輕搖動(dòng),直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。
1mol/L 二硫蘇糖醇(DTT):在二硫蘇糖醇5g 的原裝瓶中加32.4ml 水,分成小份貯存于-20℃。或轉(zhuǎn)移100mg 的二硫蘇糖醇 至微量離心管,加0.65ml 的水配制成1mol/L 二硫蘇糖醇溶液。
8mol/L 乙酸鉀(potassium acetate):溶解78.5g 乙酸鉀于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L 氯化鉀(KCl):溶解7.46g 氯化鉀于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L 乙酸鈉(sodium acetate):溶解40.8g 的三水乙酸鈉于約90ml 水中,用冰乙酸調(diào)溶液的 pH 至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液(0.5mol/L),混合后形成 EDTA 的三鈉鹽;蚍Q取186.1g 的 Na2EDTA·2H2O 和20g的 NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/L HEPES:將23.8gHEPES 溶于約90ml 的水中,用 NaOH 調(diào) pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml 的濃鹽酸至91.4ml 的水中。
25mg/ml IPGT:溶解250mg 的 IPGT(異丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml 水中,分成小份貯存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O 于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/L PMSF:溶解174mg 的 PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的異丙醇中,定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹 或貯存于-20℃。
20mg/ml 蛋白酶 K(proteinase K):將200mg 的蛋白酶 L 加入到9.5ml水中,輕輕搖動(dòng),直至蛋白酶 K 完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。
10mg/mlRnase(無(wú) DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg 的胰蛋白 RNA 酶于1ml 的10mmol/L 的乙酸鈉水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使 DNA 酶失活。用1mol/L 的 Tris-HCl 調(diào) pH 至7.5,于-20℃貯存。(配制過(guò)程中要戴手套)
5mol/L 氯化鈉(NaCl):溶解29.2g 氯化鈉于足量的水中,定容至100ml。
10N 氫氧化鈉(NaOH):溶解400g 氫氧化鈉顆粒于約0.9L 水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌),氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸鈉):稱取100gSDS 慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L 的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L 山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g 山梨(糖)醇于足量水中
使終體積為100ml。
100%三氯乙酸(TCA):在裝有500gTCA 的試劑瓶中加入100ml 水,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。(稀釋液應(yīng)在臨用前配制)
2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg 的 X-gal于1ml 的二甲基甲酰胺(DMF),用鋁箔包裹裝液管,貯存于-20℃。
100×Denhardt 試劑(Denhardt"s regent)
成分及終濃度
配制100ml 溶液各成分的用量
2 % 聚 蔗 糖(Ficoll,400型)?2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)?2%BSA(組分V)?水
2g?2g?2g?加水至總體積為100ml
依照上表稱取各組分,溶于水中定容。過(guò)濾除菌及雜質(zhì),分裝成小份于-20℃貯存。
10×標(biāo)準(zhǔn) DNA 連接酶緩沖液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端連接)
成分及終濃度
配制10ml 溶液各成分的用量
0.5mol/L Tris-HCl?100mmol/L MgCl2?100mmol/L DTT?2mmol/L ATP?5mmol/L 鹽酸亞精胺(可選)?0.5mg/ml BSA(組分 V)(可選)?水
5ml 1mol/L 貯液?1ml 1mol/L 貯液?1ml 1mol/L 貯液?200ul 100 mmol/L 貯液?50ul 1 mmol/L 貯液?0.5ml 10 mg/mL 貯液?2.25ml
將配制好的緩沖液分裝成小份,貯存于-20℃ 。
100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)
可以購(gòu)買到100mmol/L 純 dNTPs 貯液,-80℃可貯存至少6個(gè)月。
10mmol/L dNTP 混合液
成分及終濃度
配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/L dATP?10mmol/L 2ul 100 mmol/L dATP 貯液?2ul 100 mmol/L dCTP 貯液?2ul 100 mmol/L dGTP 貯液?2ul 100 mmol/L dTTP 貯液?12ul
dCTP?10mmol/L dGTP?10mmol/L dTTP?水
20%PEG 8000/2.5M NaCl
成分及終濃度
配制10ml 溶液各成分的用量
質(zhì) 量 濃 度 為20%聚乙二醇?2.5mol/L 氯化鈉?水
20g?50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉?補(bǔ)足100ml
加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中,加水至終體積100ml,用磁力攪拌器攪拌溶解。
20×SSC
成分及終濃度
配制1L 溶液各成分的用量
300mmol/L 檸 88.2g?175.3g?補(bǔ)足1L
檬酸三鈉(二水)?3mol/L 氯化鈉?水
溶解檸檬酸三鈉(二水)和氯化鈉于約0.9L 水中,加幾滴10N NaOH溶液調(diào) pH 為7.0,用水補(bǔ)足體積至1L。
DEPC(焦碳酸二乙酯)處理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中,使 DEPC 的體積分?jǐn)?shù)為0.1%。在37℃溫浴至少12h,然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min,以使殘余的 DEPC失活。DEPC 會(huì)與胺起反應(yīng),不可用 DEPC 處理 Tris 緩沖液。
甲酰胺(deionized formamide)
直接購(gòu)買或加 Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中,用磁力攪拌器輕輕攪拌1h,可去除甲酰胺中的離子。經(jīng) Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾除去樹脂后分成小份,充氮?dú)庥?80℃貯存(防止氧化)。
磷酸緩沖液(phosphate buffer)
按照下表所給定的體積,混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉(單堿)和1mol/L 磷酸氫二鈉(雙堿)貯液,獲得所需 pH 的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O)貯液:溶解138g 于足量水中,使終體
積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉(Na2HPO4)貯液:溶解142g 于足量水中使終體積為1L。
1mol/L 磷酸二氫鈉(ml)
1mol/L 磷酸氫二鈉(ml)
最終 pH 值
877?850?815?775?735?685?625?565?510?450?390?330?280
123?150?185?225?265?315?375?435?490?550?610?670?720
6.0?6.1?6.2?6.3?6.4?6.5?6.6?6.7?6.8?6.9?7.0?7.1?7.2
TE(用于懸浮和貯存 DNA)
成分及終濃度
配制100ml 溶液各成分的用量
10mmol/L Tris -HCl?1mmol/L EDTA?水
1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)?200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)?98.8ml
Tris 緩沖液(Tris-HCl buffer)
將121g 的 Tris 堿溶解于約0.9L 水中,再根據(jù)所要求的 pH(25℃下)加一定量的濃鹽酸(11.6N),用水調(diào)整終體積至1L。
濃鹽酸的體積(ml)
pH
8.6?14?21?28.5?38?46?56?66?71.3?76
9.0?8.8?8.6?8.4?8.2?8.0?7.8?7.6?7.4?7.2
二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液
電泳緩沖液
50×Tris-乙酸(TAE)緩沖液
成分及終濃度
配制1L 溶液各成分的用量
2mol/L Tris 堿?1mol/L 乙 酸?100 mmol/L EDTA?水
242g?57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L)?200ml 的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)?補(bǔ)足1L
5×Tris-硼酸(TBE)緩沖液
成分及終濃度
配制1L 溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris 堿 ?445 mmol/L 硼 酸鹽?10 mmol/L EDTA?水
54g?27.5g 硼酸?20 ml 的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)?補(bǔ)足1L
染料
1%溴酚藍(lán)(bromophenol blue)
加1g 水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml 水中,攪拌或渦旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青 FF(xylene cyanole FF)
溶解1g 二甲苯青 FF 于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml 的溴化乙錠(ethidium bromide)
小心稱取1g 溴化乙錠,轉(zhuǎn)移到廣口瓶中,加100ml 水,用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管,于4℃貯存。
凝膠上樣液(gel loading solutions)
6×堿性凝膠上樣液(室溫貯存)
成分及終濃度
配制10ml 溶液各成分用量
0.3 N 氫氧化鈉?6 mmol/L 300ul 10N 氫 氧 化 鈉 ?120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)?1.8g?15mg?25mg?補(bǔ)足到10ml
EDTA?18%聚蔗糖(400型)?0.15%溴甲酚綠?0.25%二甲苯青 FF?水
6×聚蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)
成分及終濃度
配制10ml 溶液各成分用量
0.15 % 溴 酚 藍(lán)?0.15%二甲苯青FF?5 mmol/L EDTA?15%聚蔗糖(400型)?水
1.5ml 1%溴酚藍(lán)?1.5ml 1%二甲苯青 FF?100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)?1.5g?補(bǔ)足到10ml
6×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)
成分及終濃度
配制10ml 溶液各成分用量
0.25 % 溴 酚 藍(lán)?0.25%二甲苯青FF?15 % 聚 蔗 糖2.5ml 1%溴酚藍(lán)?2.5ml 1%二甲苯青 FF?1.5g?補(bǔ)足到10ml
。400型)?水
6×甘油凝膠上樣液(4℃貯存)
成分及終濃度
配制10ml 溶液各成分用量
0.15 % 溴 酚 藍(lán)?0.15%二甲苯青FF?5 mmol/L EDTA?50%甘油?水
1.5ml 1%溴酚藍(lán)?1.5ml 1%二甲苯青 FF?100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)?3ml?3.9ml
6×蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)
成分及終濃度
配制10ml 溶液各成分用量
0.15 % 溴 酚 藍(lán)?0.15%二甲苯青FF?5 mmol/L EDTA?40%聚蔗糖?水
1.5ml 1%溴酚藍(lán)?1.5ml 1%二甲苯青 FF?100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)?4g?補(bǔ)足到10ml
10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液(室溫貯存)
成分及終濃度
配制10ml 溶液各成分用量
0.2%溴酚藍(lán)?0.2%二甲苯青 FF?200 mmol/L EDTA?0.1 %SDS?50%甘油?水
20mg?20mg?4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)?100ul 10% SDS?5ml?補(bǔ)足到10ml
三.常用培養(yǎng)基
LB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中:
蛋白胨
10g
酵母提取物
5g
氯化鈉
10g
如果需要用1N NaOH(~1ml)調(diào)整 pH 至7.0,再補(bǔ)足水至1L。注:瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。
SOB 培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中:
蛋白胨
20g
酵母提取物
5g
氯化鈉
0.5g
1 mol/L 氯化鉀
2.5ml
用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml 的小份,高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后,再在每100ml 的小份中加1ml 滅過(guò)菌的1mol/L 氯化鎂。
SOC 培養(yǎng)基 成分、方法同 SOB 培養(yǎng)基的配制,只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后,除了在每100ml 的小份中加1ml 滅過(guò)菌的1mol/L 氯化鎂外,再加2ml 滅菌的1mol/L 葡萄糖(18g 葡萄糖溶于足夠水中,再用水補(bǔ)足到100ml,用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌)。
TB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中:
蛋白胨
12g
酵母提取物
24g
甘油
4ml
各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60℃,再加100ml 滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的 溶 液 ( 2.31g 的 KH2PO4 和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌)。
2×YT培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中:
蛋白胨
16g
酵母提取物
10g
氯化鈉
4ml
如果需要用1N NaOH(~1ml)調(diào)整 pH 至7.0,再補(bǔ)足水至1L。注:瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。
YPD 培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中:
蛋白胨
20g
酵母提取物
10g
葡萄糖
20g
用水補(bǔ)足體積為1L 后,高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前,對(duì)色氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g 色氨酸,因?yàn)?YPD 培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板,需要在高壓滅菌前加入20g 瓊脂粉。
四.常用抗生素
氨芐青霉素(ampicillin)(100mg/ml)
溶解1g 氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml~50ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
羧芐青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)
溶解0.5g 羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)
溶解1g 甲氧西林鈉于足量的水中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5ug/ml 終濃度與100ug/ml 氨芐青霉素一起添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)
溶解100mg 卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)
溶解250mg 氯霉素足量的無(wú)水乙醇中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml~25ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
鏈霉素(streptomycin)(50mg/ml)
溶解0.5g 鏈霉素硫酸鹽于足量的無(wú)水乙醇中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)
溶解50mg 萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中,最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
四環(huán)素(tetracyyline)(10mg/ml)?溶解100mg 四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中,或者將無(wú)堿的四環(huán)素溶于無(wú)水乙醇,定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光,于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
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